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活性氧在蓝萼甲、乙和丙素对莴苣的化感调节和HL-60 细胞凋亡诱导中的作用研究 中文摘要 活性氧在蓝萼甲、乙和丙素对莴苣的化感调节和HL-60 细胞凋亡诱导中的作用研究 中文摘要 蓝萼香茶菜（Rabdosia japonica (Burm. f.) Hara var. glaucocalyx (Maxim.) Hara ）为 唇形科（Labiatae ）香茶菜属多年生落叶植物，广泛分布于中国东北等地。香茶菜属 植物富含的对映-贝壳杉烷二萜化合物会随着植株枯萎被释放到土壤中，对其他植物 的生长产生抑制或促进作用（化感作用或他感作用，allelopathy ）。许多单萜和倍半萜 化合物被证实为化感节物质，蓝萼香茶菜含有丰富的贝壳杉烷二萜次生代谢产物如蓝 萼甲素（Gla A ）、蓝萼乙素（Gla B ）和蓝萼丙素（Gla C ），它们是否具有强烈的化感 作用，以及在其自然生境中是否发挥重要的生态作用？目前尚无相关报道。另一方面， 蓝萼香茶菜全草入药，具有抗菌、调节心肌血流量、抗肿瘤活性。我们实验室的前期 研究已表明：Gla A 可诱导白血病HL-60 细胞凋亡，活性氧（ROS ）参与了线粒体途 径诱导的细胞凋亡，但对ROS 来源及其调节方式的研究还未见报道。本研究分别以 莴苣（Lactuca sativa L. ）和HL-60 细胞为对象，探讨Gla A、Gla B 和Gla C 的化感 作用和凋亡诱导机制，挖掘对映-贝壳杉烷二萜化合物诱导的ROS 作为植物生长调节 和肿瘤细胞凋亡中的信号意义，为深入了解蓝萼香茶菜的化学生态学意义和抗肿瘤药 学应用提供理论参考和依据。 本论文已成功完成以下四部分内容： 一、Gla A-C 的化感作用研究初探 我们测定了Gla A-C 对莴苣种子萌发和幼苗净生长率的影响，发现低浓度的Gla A （20-40 μM ）和Gla B （20 μM ）对莴苣根的生长具有促进作用，Gla A （40 μM ）和 Gla B （20 μM ）作用莴苣幼苗48 h 后，与对照组相比，处理组细胞长度分别增加了 17.34%和 14.48%，细胞有丝分裂指数（MI ）分别提高了21.59%和 28.04% 。高浓度 （80-200 μM ）的Gla A、B 对莴苣根的生长具有抑制作用，200 μM 的Gla A、B 作用 莴苣幼苗48 h 后，与对照组相比，处理组细胞长度分别下降了 35.03%和 38.54%， MI 分别下降了30.98%和40.34% 。另外，20-200 μM 的Gla A 处理48 h 后，与对照组 I 中文摘要 活性氧在蓝萼甲、乙和丙素对莴苣的化感调节和HL-60 细胞凋亡诱导中的作用研究 相比，莴苣根毛长度的下降率为23.39-96.95%，根毛密度的下降率为26.15-86.15% 。 Gla B 处理组中莴苣根毛长度的下降率为 15.76-96.71% ，根毛密度的下降率为 3.46-91.15%，说明Gla A、B 对莴苣根毛发育的抑制作用在20-200 μM 范围内具有浓 度依赖性，而Gla C 对植物均无影响。本研究结果表明：Gla A、B 对莴苣根的生长 具有“低浓度促进高浓度抑制”的双向生长调节作用，并且这种调节作用是通过影响 根细胞大小和细胞有丝分裂速率来实现的。 二、Gla A、B 诱导的活性氧与化感作用的关系研究 Gla A、B （20-200 μM ）处理莴苣3 h，莴苣根中莴苣中超氧阴离子 （O2−）分别 比对照的增加1.10-1.55 倍和1.11- 1.65 倍，而Gla C 处理则不能诱导产生O2−。200 μM 的Gla A、B 处理48 h 后，莴苣根中丙二醛（MDA ）水平分别上升了50.74%和77.32%， 导致脂质过氧化，产生氧化压力。同时，细胞中抗氧化酶系如超氧化物歧化酶（SOD）、 过氧化氢酶（CAT ）和过氧化物酶（POD ）活性显著提高，200 μM 的Gla A 处理48 h 后，莴苣根中的这三种酶活性分别上升了33.71%、43.83%和81.37%；Gla B 处理组 中，莴苣根中的这三种酶活性分别上升了45.37% 、60.18%和111.22%，而Gla