氢基胍对梗阻性黄疸大鼠肝细胞的保护作用实验及研究.pdf

氨基胍对梗阻性黄疸大鼠肝细胞保护作用的实验研究 中文摘要 目的 导致机体各系统靶器官的损害以及相应的病理生理改变，其中最主要的是肝细胞 损伤，也是其它并发症的重要诱因。OJ时肝脏的损害机制复杂，其中内毒素的 necrosisfactor oxide， 产生导致肿瘤坏死因子a(tuHmor a，n师一a)、一氧化氮(nitric NO)等炎症因子损伤是一个重要的方面。有研究表明OJ时大量产生的NO也参与 对肝细胞的损伤。目前NO对OJ时肝细胞损伤影响方面的研究报道不多。本研究 利用大鼠0J模型对大鼠血清和肝组织NO含量、肝细胞的氧化损伤、肝细胞病理 标的变化进行了研究，并进一步从NO对oJ肝细胞损伤机制方面作了探讨。 方法 1．动物和分组：将48只雄性s—D大鼠，体重2509一3009，随机分为6组：①假 手术组(S组)；②胆管结扎组(BDL)；③阳性对照组：胆管结扎+古拉定组 125m∥Kg(BDL+GLD)； (BDL+HAG) 2．动物模型制作：①组开腹后单纯游离胆管不予结扎，②、③、④、⑤、 ⑥组行胆总管结扎术，并离断胆管，术后6小时开始进食，④、⑤、⑥各组术后 第3日按不同剂量腹腔注射氨基胍，分别为0L25n培／Kg、OM50mg服g、 oHl00mg／Kg。③组术后第3日腹腔注射古拉定(125mg／Kg)。 3．检测方法和观测指标：①血液中一氧化氮(NO)、肝组织中NO、丙二醛 (MDA)、超氧化物歧化酶(SoD)含量测定按照试剂盒说明书进行；②肝组织 苏木素．伊红染色观察病理变化；③通过免疫组织化学染色观察肝组织表达的诱 nitricoxide 导型一氧化氮合酶(iIlduciblesynth嬲e，iNOS)；④行脱氧核苷酸末端 dUTP 转移酶介导的缺口末端标记(Tcminal mediated deoxynucleotidyl仃ansferase nick-end—labeling，n肘EL)染色检测肝细胞凋亡数。 析t检验，P0．05即认为有统计学意义，PO．0l有显著性差异。。 结果： 1．假手术组大鼠行动敏捷，对疼痛刺激反应灵敏，皮肤、尿液颜色无改变； 腹腔无腹水，肝脏颜色鲜红，表面有光泽，质地柔软，胆管未见扩张；光镜下见： 肝细胞无肿胀、坏死，肝细胞索排列整齐。而②、③、④、⑤、⑥各组大鼠均有 不同程度的行动迟缓、对疼痛刺激反应迟钝，皮肤、尿液呈黄色，腹腔有少量淡 黄色腹水；肝脏颜色淡黄，呈程度不等的瘀胆状，表面无光泽，结扎处近肝侧胆 总管呈直径约O．3cm-O．6cm不等的扩张；细胞呈不同程度肿胀、脂肪变性，肝内小 胆管扩张，少量纤维组织增生。 2．②组、③组、④组、⑤组、⑥组血清和肝组织中NO含量、肝组织MDA 值以及肝细胞凋亡指数均明显高于假手术组(PO．01)，而各组SoD值则明显低 于假手术组(P0．01)。与②组相比，④组、⑤组、⑥组在给予AG后血清和肝组 织中NO含量有不同程度下降(PO．01)，血清MDA值和肝细胞凋亡指数下降 值升高(P0．01)。 3．免疫组织化学法检测肝组织iNOS蛋白阳性细胞为呈棕黄色颗粒的阳性 反应产物，假手术组未见阳性细胞，iNOS表达(．)，而②组、③组、④组、⑤ 组、⑥组肝组织出现明确的阳性细胞，iNOS表达(+)，提示梗阻性黄疸肝细胞 有iNOS蛋白表达。 结论： 1．梗阻性黄疸时，大鼠肝组织有iNOS表达并催化产生大量NO，导致血 清和肝组织中NO含量增高； 2．梗阻性黄疸时应用氨基胍选择性抑制iNOS，可降低大鼠体内NO的含量， 并且能够减轻肝细胞氧化损伤及凋亡程度，提示梗阻性黄疸大鼠肝脏氧化损伤及 2 凋亡可能与iNos催化产生大量的NO有关； 3．氨基胍对梗阻性黄疸造成的肝细胞损伤有一定的保护作用。 关键词：梗阻性黄疸一氧化氮氨基