珍稀药用植物竹节参srap-pcr反应体系de构建 优化学习资料.pdfVIP

第34卷第2期 武 汉 轻 工 大 学 学 报 Vo1．34No．2 2015年 6月 Journal of Wuhan Polytechnic University Jun．2015 文章编号：2095-7386(2015)02-0014-06 DOI：10．3969／j．issn．2095-7386．2015．02．004 珍稀药用植物竹节参 SRAP—PCR 反应体系的构建与优化 宋 佳，张绍鹏，孙 巧，李天佩 ，曾万勇，陈 平 (武汉轻工大学 生物与制药工程学院，湖北 武汉430023) 摘 要：人参属重要的药用植物竹节参(PanaxjaponicusC．A．Mey)野生资源已近濒危，开展 其遗传多样性研 究对于资源保护和可持续利用具有重要意义。研 究构建并优化 了竹节参 DNA的SRAP—PCR扩增体系。以竹节参根茎为材料，对PCR反应体系中的dNTPs、DNA模板、 引物、TaqDNA聚合酶浓度和复性第二阶段的退火温度等条件进行探索和研究，得到了能稳定 扩增竹节参基因组的最佳反应体系(251)：DNA40ng，drPs0．2mmol／L，Primer0．361~mol／ L，10XPCRBuffer2．5ul，TaqDNApolymerase2U，退火温度 50cI=。进一步检测 了随机组合的 24对引物，进行扩增，得到了2对带型清楚、重复性较好的引物Mel／Em5和Me3／Eml。以这 2对引物对 10个不同产地竹节参DNA样品进行 SRAP—PCR扩增。产物的电泳图谱表明，竹 节参不同产地的DNA谱带多态性丰富，带型清晰，重复性好。说明建立的该SRAP—PCR反应 体系稳定可靠，为利用SRAP分子标记技术研究竹节参的植物遗传多样性奠定了工作基础。 关键词：竹节参；SRAP—PCR反应体系；构建；优化 中图分类号 ：Q949．95；TQ46O．6 文献标识码 ：A OptimizationbySRAP．PCR reactionsystem inrare medicinaIherbPanaxiaponicusC．A．Mey SONGJia，ZHANGShao— ，SUNQiao，LITian—Pei，ZENGWan一 ，CHEN ，lg (SchoolofBiologyandPharmaceuticalEngineering，WuhanPolytechnicUniversity，Wuhan430023，China) Abstract：PanaxjaponicusC．A．Mey，animportantmedicinalherb，itswildresourcesalrebecomingendangered． GeneticdiversityresearchofP．japonicasissignificantfortheconservationnadsustainableutilizationofhtesere- sources．Inhtisstudy，optimum SRAP—PCRreactionsystem ofrP．japoncias DNAwasconstructedofrhtefirst time．TheDNAofrhizomeinP．japonciuswasbastractedasPCRtemplate．And．hteconcentrationgradientof dN3Ps，primer，DNA na dTaqpolymeraseandT were assessedrespectivelytooptimizeSRAP—PCR reactionsys— tem．AnoptimalnadstableSRAP-PCRsystemofrP．japonicus(T0tal0f25 )Wasasfollows：DNA40ng，dNTPs 0．2mmol／L，primer0．36umol／L，10×PC RBuff er2．5 l，Taqpol