ND-308抗脑缺血-再灌注损伤作用与机制初步探讨.pdf

摘要 脑血管病是临床常见病、多发病，其发病率高、致残率高、死亡率高，是严重 危害人类健康的重大疾病之一。其中，缺血性脑血管病的发病在临床更为多见，尽 早的恢复脑血流和尽可能的逆转受损的神经细胞，是目前治疗的重点。然而若不能 及时恢复血流，则会引起脑缺血再灌注损伤，使病情加重。近来研究发现，脑血流 中断和血液再通使脑的组织、细胞产生损伤是一个动态、快速发展的级联反应。这 个损伤级联反应包括兴奋性氨基酸毒性、能量代谢障碍、细胞内钙超载、炎症反应 等多种病理机制。目前，缺血性脑中风的治疗仍以溶栓、抗凝、抗血小板聚集以及 脑保护剂为主。溶栓、抗凝、抗血小板聚集在缺血性脑血管病急性期具有较好的效 果，但对治疗时间窗要求苛刻，并具有溶血等不良反应。因此，寻求新的治疗方法 和药物迫在眉睫。 ND．308是以天然药物为母体经过结构改造的具有自主知识产权的新化合物， 前期实验证明，其具有扩张冠脉血管，改善心脏缺血区的血流，缩小急性心肌梗塞 的范围以及改善缺血再灌流引起的心肌功能损伤等多种药理作用。本实验采用大鼠 局灶性缺血再灌注模型，考察了ND．308对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用，并 对其可能的神经保护作用机制进行了初步探讨，为此药的开发研究提供实验依据。 第一部分ND．308对大鼠脑缺血损伤的保护作用研究 采用栓线法制作大鼠大脑中动脉栓塞(MCAO)模型，缺血2h后抽出鱼线实现 脑血流再灌。选取手术成功的大鼠96只，分为4组：正常对照组、模型组、ND．308 10mg／kg组、ND．308 经尾静脉注射给药，正常对照组和模型组分别给予相同体积生理盐水。于缺血2h再 灌注24h末对由一位不了解实验分组的实验者对大鼠进行神经功能障碍评分，后将大 鼠处死断头取脑测定脑含水量、梗死体积；取缺血侧视交叉和漏斗柄连线中间处的 脑组织(1．5cm3)，用4％的多聚甲醛固定，制作常规石蜡切片，苏木精．伊红(HE) 染色观察损伤程度。结果显示ND．308能明显降低脑神经功能缺损评分，脑含水量及 梗死体积，减轻脑组织损伤，与模型组相比有显著性差异(pO．05或0．01)。 第二部分ND．308抗脑缺血损伤的机制探讨 一、ND．308大鼠脑缺血再灌注损伤所致细胞凋亡的影响 选取手术成功SD大鼠20只，分为正常对照组、模型组、ND．308 10mg／kg组、 ND．308 20mg／kg组，每组5只，于缺血2h再灌注24h末，断头取脑，制作石蜡切片， 通过脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)染色来检测缺血 半影区神经细胞凋亡，并用免疫组织化学法对细胞凋亡相关蛋白因子：B细胞淋巴 缺血区神经织细胞凋亡的影响。实验结果表明： ND．308能明显减轻脑缺血再灌注 引起的病理组织损伤，抑制缺血半影区神经细胞的凋亡(p0．05或p0．01)，能明显 ND．308抗脑缺血损伤的作用可能与其抑制缺血损伤后细胞凋亡的作用有关。 二、ND．308对大鼠脑缺血再灌注损伤所致炎症反应的影响 选取手术成功SD大鼠20只，分为正常对照组、模型组、ND一308 10mg／kg组、 ND．308 20mg／kg组，每组5只，于缺血2h再灌注24h末，腹主动脉采血，离心取血清， 并取缺血侧视交叉和漏斗柄连线中间处的脑组织(1．5em3)，制作石蜡切片，免疫组 量，考察ND．308对I／R所致炎症反应的影响。结果表明：I瓜侧大脑半球皮质IL．p、 TNF．a表达明显增强，NF．心表达增强且向细胞核内转移，与模型组相比ND．308给 转移。ELISA法测定再灌注24h后大鼠血清中IL．D含量明显增加，与免疫组化结果一 与抑制炎症反应密切相关。 结论：ND．308对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤有明显的保护作用。ND．308的神 经保护作用机制可能与其减轻细胞因子介导的炎症反应、抑制神经细胞凋亡有关。 关键词：ND-308；脑缺血再灌注；炎症反应；核因子-cB；细胞凋亡 Abstract inthe Cerebrovasc