人乳头瘤病毒和B病毒感染与上消化道肿瘤相关性研究.pdf

摘 要 摘 要 目的： 1. 研究人乳头瘤病毒（human papillomavirus ，HPV ）感染与食管癌（esophageal carcinoma，EC ）发生的相关性：检测我国不同区域 EC 患者癌组织中 HPV 感染率及其 型别，了解我国不同区域 EC 组织中 HPV 型别分布特性；检测 HPV16 E2/E6 基因比率， 分析 EC 样品中 HPV16 的整合状态；检测HPV 整合在染色体的位置，以及通过对我国 已发表的有关HPV 与 EC 相关文献的 Meta 分析，探讨 HPV 感染与我国 EC 发生的病因 学关系。 2. 研究 EB 病毒（Epstein-Barr virus，EBV ）感染与胃癌发生的相关性：通过对PubMed 数据库中的有关 EB 病毒（Epstein-Barr virus，EBV ）与胃癌相关文献的Meta 分析，探 讨 EBV 感染与胃癌发生的相关性；构建携带 EBV 编码 BARF1 基因的真核表达载体， 为今后建立 EBV 感染体外模型奠定基础，以便进一步探讨 EBV 感染与胃癌发生的病因 学关系。 方法: 1. 应用 HPV L1 基因区通用引物 PGMY09/11 和 GP5+/6+，进行巢式聚合酶链反应 （nested polymerase chain reaction ，NPCR ）；应用HPV （包括HPV16 、HPV18 ）E6-E7 基因保守区的简并引物，及 HPV16 E6 、HPV18 E6 型特异引物进行巢式多重聚合酶链反 应（nested multiplex Polymerase chain reaction ，NMPCR) ，检测EC 组织中HPV16 和HPV18 两型别；分析我国不同区域 EC 标本中 HPV 感染状况。 2. 应用 HPV16 E2 和 E6 引物进行实时荧光 PCR 扩增，检测 HPV16 E2 与 E6 的含 量，通过 E2 与 E6 的比率，确定 HPV 整合状态；用 β-actin 引物进行荧光 PCR 扩增， 检测每一样品中 β-actin 含量，通过 HPV16E6 与 β-actin 之比，估算 HPV16 的病毒载量。 3. Oligo(dT)17-P3 引物反转录 PCR 扩增 cDNA 的第一链，HPV E7 特异 P1 forward 与 P3 reverse 引物第一轮扩增，HPV E7 特异 P2 forward 与 Oligo(dT)17-P3 reverse 引物 第二轮扩增，将第二轮产物连接到 pMD-18T 载体，进行测序分析，分析 HPV 整合在人 染色体的位置。 4. 确定文献选择与剔除标准后，以 HPV 和食管癌为关键词，在国内万方网和中国 I 摘  要  知网，检索有关HPV与食管癌相关的研究论文，依据 Cochrane 系统，按照Mantel–Haenszel 方法，对文献数据作出异质性检验，应用随即效应模型，计算各项研究文献中食管癌病 例组和正常对照组中 HPV 的优势比（odds ratio，OR ）、权重（weight ）、95%可信区间 （95%CI ）及合并后的权重和95%CI 。数据处理采用Review Manager 4.2 软件完成，以 P ＜0.05 为差异有显著性。进一步验证HPV在我国食管癌发生中的病原学作用。 5. 确定文献选择与剔除标准后，以 EBV 和胃癌为关键词，在 PubMed 数据库中， 检索有关 EBV 与胃癌相关的研究论文，依据 Cochrane 系统，按照 Mantel–Haenszel 方 法，对文献数据作出异质性检验，应用随机效应模型，计算各项研究文献中EBV相关胃 癌与临床病理特征的优势比（odds ratio，OR ）、权重（weight ）、95%可信区间（95%CI ） 及合并后的权重和 95%CI 。数据处理采用Review Manager 4.2 软件完成，以 P ＜0.05 为 差异有显著性。进一步验证EBV在胃癌发生中的病原学作用。 6. 根据 GenBank 提供的 cDNA 序列，设计特异性引物，构建 B