白眉蝮蛇去整合Adinbitor对小鼠肝移植瘤作用的实验研究.pdfVIP

白眉蝮蛇去整合素Adinbitor对小鼠 肝移植瘤作用的实验研究 硕士研究生：闫建义 指导教师：徐跃飞 教授 专业名称：生物化学与分子生物学 摘 要 原发性肝癌(HCC)是我国常见的恶性肿瘤之一，年病死率已上升为 城市和农村恶性肿瘤病死率的第2位和第1位，五年的生存率仍不高，但 是很多治疗手段已经发展起来了，去整合素就是其中的一种。 含量丰富，分子量为5-9kD。去整合素可凭借其RGD识别序列而成为整 合素强有力的竞争性拮抗剂，从而抑制整合素参与的多种生理活动。 研究证明不同的整合素成员在肿瘤细胞内的表达水平有差异，在肿 瘤发生的不同阶段表现为截然不同的作用，表明整合素可通过传递特定 的信号或诱导基因表达来调控肿瘤细胞的粘附、增殖、浸润和转移、凋 matrix，ECM)蛋白成分都含 序列，而大多数细胞外基质(extracellular 有RGD序列，故去整合素可凭借其RGD识别序列而成为细胞外基质与 细胞整合素间结合的强有力的竞争性拮抗剂，从而抑制整合素参与的多 种生理活动。 去整合素Adinbitor是由来自于中国旅顺的白眉蝮蛇又名短尾蝮 (Gloydius 残基组成，含有l2个半胱氨酸残基和1个去整合素特征性RGD三肽识 别序列，相对分子量为9kD，为去整合素家族的新成员，故可作为多种 整合素受体的强有力的拮抗剂，具有抑制肿瘤的作用。 BL21，即其已 正因为这样，本实验将冻存的新鲜阳性表达菌E．coli 复苏和IPTG的诱导表达，得到重组蛋白Adinbitor的可溶性高效表达， 经组氨酸亲和层析柱纯化，获得了分子量为9kD的去整合素Adinbitor， 从而对白眉蝮蛇去整合素Adinbitor对小鼠移植瘤的作用方面进行研究。 将40只小鼠利用随机排列表随机分为5组，每组8只，皮下接种瘤细 胞悬液，建立BALB／C小鼠H22肝癌移植瘤模型。在小鼠H22肝癌细胞种 植后第2天开始给予·腹腔注射低、中、高剂量Adinbitor，以腹腔注射内皮 抑素作为阳性对照组，O．9％生理盐水作为阴性对照组。每天给药，连续 20天。停药次日，断颈处死小鼠，剥离瘤组织称重，计算抑瘤率。实验 结果显示，Adinbitor低剂量组抑瘤率为44．21％、中剂量组抑瘤率为 64．80％、高剂量组抑瘤率为70．3 8％、内皮抑素组抑瘤率为71．67％。低剂 量组、中剂量组与内皮抑素组相比具有统计学差异(P0．05)，高剂量组与 内皮抑素组差异不显著(P0．05)，说明高剂量组疗效和内皮抑素组相当。 总之，本论文通过诱导表达并纯化获得了重组蛋白即去整合素 Adinbitor，在体内研究其对H22肝癌移植瘤的作用。实验结果表明，去 整合素Adinbitor具有体内抑制移植瘤生长的作用。从而提示去整合素这 一生物活性因子，可作为新型抗肿瘤物质为临床治疗恶性肿瘤提供了新 的思维和手段，为人类战胜癌症展示了新的前景。 关键词： 去整合素 肝癌细胞H22 动物实验 onthe effectofAdin Study inhibitory bitor，a disintegrin from theSnake Venomof the Gloydius brevicaudus，on ofthe 22inmice growthhepatocarcino