油菜抗咪唑啉酮类除草剂基因BnALS1R等位基因特异PCR标记的开发与应用（原版论文）.pdfVIP

作物学报 ACTA AGRONOMICA SINICA 2013，39(10)：1711-1719 http：／／zwxb．chinacrops．org／ ISSN 0496—3490；CODEN TSHPA9 E—mail：xbzw@chinajourna1．net．ca DoI：10．3724／SP．J．1006．2013．01711 油菜抗咪唑啉酮类除草剂基因BnALS1R等位基因特异PCR标记的开 发与应用 胡茂龙 龙卫华 高建芹 付三雄 锋 周晓婴 彭 琦 张 维 浦惠明 戚存扣 张洁夫 松 江苏省农业科学院经济作物研究所 ／国家油料作物改良中心南京分中心 ／农业部长江下游棉花与油菜重点实验室，江苏南京 210014 摘 要：油菜抗咪唑啉酮类除草剂基因BnALS1R是从抗性突变体M9中克隆获得，抗性基因BnALS1R与野生型基 因 BnALS1存在 1处 SNP，即乙酰乳酸合酶第 638位丝氨酸残基被天冬酰胺酸替代 。为获得油菜抗除草剂基因BnALS1R 的分子标记，根据该处点突变，结合获得的BnALS3与BnALS1序列，开发30条等位基因特异PCR(allele—specificPCR， AS—PCR)~I物，采用筛选出的3条 AS—PCR引物在 F2、BC1和 BC2群体中进行 PCR扩增 。结果表明，该标记有效检 测出群体中存在的3种基因型，其分离 比分别为 1：2：1、1：1、1：1，均遵循单基因遗传规律。应用该标记对获得 冻 陈 的抗性恢复系进行PCR扩增，结果发现所有抗性恢复系均能扩增出抗性基因BnALS1R 目的条带，表明3条标记引物 可应用于抗性基因的检测。AS—PCR标记的获得将促进以抗性基因进行油菜抗除草剂分子标记辅助选择育种。 关键词：油菜：咪唑啉酮类除草剂5·BnALS1R；乙酰乳酸合成酶；等位基 因特异PCR DevelopmentandApplication ofAllele--SpecificPCR M arkersforImidazoli-- none-ResistantGeneBnALS1R inBrassicanapus HUMao-Long，LONGWei-Hua，GAOJian—Qin，FU San—Xiong，CHENFeng，ZHOUXiao—Yin，PENGQi， ZHANGWei，PUHui—Ming，QICun—Kou，ZHANGJie—Fu，andCHEN Song InstituteofIndustrialCrops，JiangsuAcademyofAgriculturalSciences／NanjingSub—center,NationalCenterofOilCropsImprovement／KeyLabo— ratoryofCottonandRapeseed(Nanjing)，MinistryofAgriculture，Nanjing210014，China Abstract：ABnALS1RgeneconferringresistancetotheimidazolinoneherbicideswaspreviouslyisolatedfromanALS(acetolac． tatesynthase)inhabitingherbicide．resistantmutantlineM9inBrassicanapHs．A singlenucleotidepolymorphism 1eadingtoan aminoacidsubstitutionrfom serinetoasparagineatsite638ofALSwasfoundbetweentheBnALS1RinthemutantandBnALS1 inthewildtype．Wereposedherethedevelopmentofpolymorphicmolecularmarkerforallele．specificPCR (AS．PCR、assaysto distinguishherbicide-susceptibleandresistantALSallelesineitherhomozygousorheterozygousgenotypes．Thirt