鱼藤酮通过抑制tor信号通路诱导神经细胞死亡分子机理初步研究.pdfVIP

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2015-11-06 发布于贵州
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鱼藤酮通过抑制tor信号通路诱导神经细胞死亡分子机理初步研究.pdf

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鱼藤酮通过抑制tor信号通路诱导神经细胞死亡分子机理初步研究

摘要 1 摘要本研究运用细胞培养、RNA干扰、Westernblotting等细胞学分子生物学技术，初步研究了鱼藤酮诱发神经细胞死亡过程中mTOR信号通路的变化，探讨防止鱼藤酮诱发的神经变性相关疾病提供科学的指导和依据。具体结果如下： 1鱼藤酮通过抑制mTOR通路诱导神经细胞死亡研究 PCI2细胞或分离的小鼠原代神经元悬液接种于6孔培养板或96孔培养板 h，或中，以不同浓度鱼藤酮(0．05、0．1、0．3、O．5和10M)处理神经细胞24 h，观察鱼藤酮处理神经细胞的最适时间和用1斗M鱼藤酮处理神经细胞为O．48 法分析细胞活性，Western 酸化表现。结果显示，鱼藤酮诱导神经细胞死亡明显的适宜浓度为O．5和1 pM，时间在24h后；鱼藤酮抑制S6K1和4E．BPl的磷酸化以浓度依赖的方式逐渐下 h内S6K1和4E—BPl 降，用1斗M鱼藤酮处理PCI2细胞和原代神经元可见48 磷酸化水平也随时间增加而下降，在24h后呈显著抑制表现；mTOR过表达或持续激活S6K1表达部分地阻止鱼藤酮诱导的神经细胞死亡。提示：鱼藤酮通过抑制mTOR通路诱导神经细胞死亡。探讨 PC 12细胞或分离的小鼠原代神经元悬液接种于6孔培养板或96孔培养板中，以不 mM h或36h；或用2．5 同浓度鱼藤酮(0．05、0．1、0．3、O．5和1¨M)处理神经细胞24 h；或用腺病毒干扰 NAC预处理PCI2细胞lh后，再用O．5和1肛M鱼藤酮处理为24 blot分析蛋白变化。我们发现，鱼藤酮诱内cd+强度；MTT评估细胞活性；Western 诱发ROS和胞内Ca2+升高导致神经细胞死亡与mTOR通路抑制有关系。关键词：鱼藤酮；神经细胞；活性氧簇；钙离子；mTOR；死亡刘佳：鱼藤酮通过抑制mToR信号通路诱导神经细胞死亡分亍机理初步研究 2 Summary andmethodsofcell The culture，RNA presentstudy,usingtechniques blot the of investigatedchange interference，Westemanalysis，etc．，preliminarily neuronaldeath．The mTOR inthe ofrotenone—induced signalingpathwayprocess ROSandintracellularfreeC一+elevation mechaIlismsofrotenone—in