一种简便的高通量细胞内GFP报告基因检测方法.pdfVIP

技术与方法 Vol.27 No.5 Sept. 2015 一种简便的高通量 A simple and high throughput 细胞内GFP报告 screening method for GFP 基因检测方法 reporter assay in cells 杨少哲1，2，石海军1，2，褚欣然1，2， 周小玲1，2，孙平楠1，2，* 1，2 1，2 1，2 YANG Shaozhe ，SHI Haijun ，CHU Xinran ， （1. 汕 头大学医学院干细胞P2实验室，广东 1，2 1，2，* ZHOU Xiaoling ，SUN Pingnan 汕头 515041；2. 广 东省感染病与分子免疫病理 (1. Stem Cell P2 Laboratory, Shantou University Medical College, 重点实验室，广东 汕头 515041） Shantou 515041; 2. Guangdong Provincial Key Laboratory of Infectious Diseases and Molecular Immunopathology, Shantou 515041, Guangdong, China) 【摘要 】目的： 建立一种简单、快速、高通量的检测GFP蛋白的方法。方法：用TECAN多功能酶标仪Infinite M200pro检测GFP蛋白 在不同缓冲液中的荧光强度；用酶标仪检测含GFP的蛋白样品梯度稀释后的荧光强度，建立荧光强度与GFP相对含量之间的标准 曲线；分别比较荧光酶标仪的检测结果与流式细胞术和Western-blotting检测结果的相关性。 结果：使用 50 mmol/L Tris- HCl(pH=10)的缓冲液稀释GFP蛋白更有利于检测低浓度的GFP；荧光酶标仪检测GFP的荧光读数同GFP相对含量之间的回归系数 2 R 0.99 。荧光酶标仪检测GFP蛋白的结果与流式细胞术、Western-blotting的检测结果之间均呈现明显的相关性。结论：建立的利 用多功能酶标仪检测GFP蛋白方法方便快捷，可以实现短时间对大样本进行检测。 【关键词 】绿色荧光蛋白；报告基因；高通量检测；多功能酶标仪 中图分类号：Q291 文献标志码： A 文章编号： 1004-616X(2015)05-0394-06 doi: 1