磷酸苏氨酸裂合酶SpvC、OspF抑制剂设计.pdf

磷酸苏氨酸裂合酶SpvC、OspF 抑制剂的设计 of Design MAPK Phosphothreonine Lyase 专 业： 塞醛三堡 研 究生： 王 超 生物技术与食品科学学院 二零一一年五月 摘要 MAPK信号通路广泛存在于动植物中，是细胞内重要的信号转导途径。病原 菌能通过破坏MAPK信号通路来突破动植物个体的免疫防线，进攻组织和细胞， 导致疾病的发生。效应蛋白SpvC、OspF是分别由沙门氏菌和志贺氏菌分泌的毒 力蛋白，通过III型分泌系统注入到宿主细胞，不可逆灭活宿主MAPKs，破坏宿主 的先天免疫防线。有研究证实，以SpvC为代表的蛋白家族是一类新的酶，称作 磷酸苏氨酸裂合酶，这类裂合酶能特异的识别磷酸化的MAPKs(p-MAPKs)的进 化保守“pT-X—pY序列，并不可逆的催化该模体中的磷酸苏氨酸(pT)发生B 消去反应，形成Q、B一不饱和双键并释放一分子游离磷酸。当使用磷酸丝氨酸 酶也能催化其发生上述反应。更进一步的研究发现，SpvC、0spF能与这种双键 结构发生加成反应而失活。 基于对SpvC家族的磷酸苏氨酸裂合酶催化机制的了解，本文设计了三种磷 酸苏氨酸裂合酶的不可逆多肽抑制剂。通过对其抑制效果的分析、比较，发现抑 p II 别为200M和400 度均为50％，而二者对OspF的抑制作用并不明显，对酶的活性基本无影响；另 到相同抑制效果所需的时间越短。这些结果说明，与抑制剂Erk2-AS和p38- △S相比，SpvC、0spF更偏好抑制剂Erk5-△S的结构，使得加成反应更易发生， 这可能与多肽Erk5-AS中第216位的酪氨酸(Y216)有关。 本文不但为酶的不可逆抑制剂提供了个案，更为重要的是丰富了SpvC家族 磷酸苏氨酸裂合酶的酶学性质，而且对于多肽类新药的研制有重要的理论和实践 价值。 关键词：磷酸苏氨酸裂合酶；Q，D一不饱和双键：加成；抑制剂；MAPKs 2 ABSTRACT animaland is MAPK existinboth generally,and signalingpathway plant of bacteriaCan the breakthrough signaltransduction．Pathogenic importantpathway cell lineofdefense MAPK toattacktissueand immunity bydisturbingpathway in from Salmonella nontyphoid species resultingpathema,sometimesseriously．SpvC and bothvir