新型组织工程人工小口径血管的构建及其抗凝性能的研究.pdf

I-海交理大掌博士后研完工作报告 中文摘要 【目的】 应用组织工程方法构建可降解性小口径人工血管支架，对其进行生物力学研 究和体内降解实验；分离和培养犬骨髓CD34+细胞，研究其生物学特性并种植于 小口径人工血管支架内表面；对小口径人工血管的内皮化和抗凝性能进行研究， 以筛选更理想的细胞源。 【方法】 ①筛选出具有抗张强度高、力学性能优良的聚对二氧环己酮(PDS)可吸收缝线 进行编织，测定和分析PDS缝合线的生物力学性能，并通过对不同的编织工艺加 以研究、比较，选择最为合适的编织方法和工艺编织血管支架。 ②以可降解的PDS缝合线编织成的网管状织物作为血管支架，模仿天然血管的 三层结构，内层涂以共混硫酸软骨素一胶原海绵，外层包被小肠黏膜下层(SIS)， 检测血管支架的生物力学性能(爆破压力、抗拉伸能力、顺应性等)，并与正常 生理血管进行比较。将支架材料植入比格犬背部脊柱两侧肌肉内，于2、4、8、 12、24周取出，行组织学和透视电镜观察，观察其组织反应及降解情况。 流式细胞仪检测细胞纯度，DMEM液培养，内皮细胞生长因子(VEGF)诱导分化， 成血管实验鉴定细胞特性和功能。 ④将诱导的MNCs和CD34+细胞种植于人工小血管支架内表面，人工小血管置换 一段犬颈动脉，构建动物模型。扫描电镜观察细胞在人工血管腔面的分布和生长 情况。行体内外血小板粘附实验和血栓形成实验比较两种常用种子细胞抗凝性能 的差异。 【结果】 ①聚对二氧环己酮单丝强度高，断裂强度和断裂伸长率两个指标PDS均大于直 径相同的聚丙烯纤维。PDS纤维柔顺性好，编织性能好，采用规则编织结构可编 织出强度高弹性好、孔隙率大、光滑平整的网状血管支架。 ②所制备的复合型人工血管的爆破压为(43．5±8．3)kPa，断裂强度为(19．10 上海交通大掌博士后研究工作报告 ③植入体内2-4周时，SIS与胶原层清晰可见，炎细胞浸润较多，扫描电镜见 胶原海绵网孔结构破坏融合，形成板层结构，海绵结构基本保持。12周时，自 身纤维结缔组织完全取代胶原蛋白海绵材料，纤维组织广泛长入网材孔间隙内， 炎性细胞减少，PDS发生了部分降解。24周时，支架材料完全吸收，被新生纤维 组织填充，炎细胞和和异物巨噬细胞少见。降解过程中未见材料周围组织变性、 坏死或肉芽肿异常增生现象。 ④经流式细胞仪测定，免疫磁珠方法分离的细胞中CD34+细胞含量为78．46± 6．37％。经免疫磁珠分离获得的骨髓CD34+细胞在倒置显微镜下为折光性强的圆形 细胞，大小均一，24h后观察开始出现贴壁细胞，呈圆形，随后逐渐伸出伪足， 倒置显微镜下刚贴壁的细胞呈典型的“鹅卵石”状，细胞形态逐渐演变成梭型， 两周后细胞基本铺满培养瓶底面。 功能实验阳性，体外成血管实验阳性，证明CD34+被成功诱导向内皮细胞分化。 ⑥扫描电镜观察内皮细胞在人工血管内表面的种植情况，可见大量内皮细胞粘 附于人工血管内表面，细胞形态伸展，连续性较好，有伪足伸出并长入血管内表 面微孔内。 ⑦体内外血小板聚集实验可见MNCs细胞组血小板粘附数量明显多于CD34+细胞 组，说明CD34+细胞诱导后具有抗血小板粘附聚集的能力。大体标本HE染色同 样显示CD34+细胞诱导后具有较强的抗血栓形成的能力。 【结论】 ①聚对二氧环己酮力学性能优良，可作为可降解性小血管支架的编织材料。采 用65度编织工艺角和规则编织结构的编织工艺，可制备出力学性能良好，弹性 回复率佳的小口径网管作为组织工程血管支架。 ②所制备的复合型小口径人工血管支架的生物力学性能良好，能满足体内植入 的要求。 ③所制备的复合型小口径人工血管支架生物相容性好，组织反应轻，降解时间 合适。 ④免疫磁珠方法可分离得到高纯度的骨髓CD34+细胞，且CD34+细胞经VEGF诱导 I-海交厦大掌博士后研究工fr，臣鲁 后可定向分化为内皮细胞。 ⑤骨髓CD34+细胞经培养诱导后可种植于人工血管内表面，内皮化效果理想。 ⑥作为种子细胞，种植于人工小血管内表面，CD34+细胞较MNCs具有更强的 抗凝性能。 【关键词】 聚对二氧环己酮；小血管：组织工程；内皮前体细胞；骨髓间充 质干细胞；抗凝 上海交通大掌博士后研究工作报告 英文摘要 ofanovelsmall-·diameter Theconstruction vascularandthe