银杏苦内酯B对重症急性胰腺炎大鼠胰腺组织G-%2cα-q、G-%2cα-11及其G-%2cα-i2+mRNA表达的影响.pdfVIP

中文摘要 银杏苦内酯B对重症急性胰腺炎大鼠胰腺组织 l及G。i2mRNA表达的影响 G。q、G。l 摘 要 目的：血小板活化因子(PAF)是迄今发现最强的血小板聚 集剂及血管活性脂类递质，在重症急性胰腺炎(SAP)时胰腺局 部损伤及全身微循环障碍的发生过程中起了举足轻重的作 递至细胞内来调节细胞的生命活动。PAFR属于七次跨膜的G 蛋白偶联受体家族，活化后偶联于特异性的异三聚体G蛋白， 开启胞内相应的信号转导通路。 异三聚体G蛋白由a、B和1，三种不同的亚单位组成，a亚单 位(G。)是功能性亚单位，决定G蛋白的活性，在G蛋白与受体 及效应器的结合中起主要作用。根据国氨基酸序列同源性的 不同将其分为G嘏、Gni、G明、Ga,12四类共二十余种亚型。 PAFR主要与G胡及G。i等G蛋白n亚单位相偶联，产生第二信 使将胞外信号转导至细胞核。另外，PAF也可以非受体依赖 的将细胞外化学信号传递至胞内而发挥作用。迄今为止，G一 蛋白在胰腺组织的表达情况及PAFR在胰腺组织所偶联的Gm 蛋白亚型，在国内外相关期刊尚未见报道。 B，代号 PAF的特异性拈抗剂银杏苦内酯B(Ginkgolide 为BN52021)是从银杏叶中提取的萜内酯之一，可以竞争性 52021 的与PAFR相结合，而强烈抑制PAF的生理活性。BN 用于实验性SAP的治疗也取得了良好的治疗效果，但其具体 作用机制尚不明确。本研究用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR) 中文摘要 mRNA l及G．i2 检测BN52021对SAP大鼠胰腺组织Goq、Gnl 表达的影响，探讨G蛋白在SAP时PAF信号转导过程中的作用 以及BN52021应用于SAP的治疗机制。 方法：1实验对象与分组：Wistar大鼠180只，体质量 n=60)及BN 相点(1h、2h、3h、6h、12h、24h)，各组10只。 2模型制备与标本采取：大鼠称重，标记，术前24h禁 食，自由饮水。0．4％戊巴比妥钠(40mg·kgd)腹腔注射麻醉。 仰卧位固定后，备皮、消毒、铺无菌巾，于上腹正中做2cm 切口进入腹腔。找到大鼠的十二指肠和胆胰管后，用无创血 管夹夹住胆胰管肝端，用钝头针头经十二指肠浆肌层行胆胰 管逆行穿刺术。穿刺成功后，微量注射器逆行胆胰管注射5 用无创血管夹夹住胆胰管入十二指肠处，观察10rain，去除 血管夹，确认腹腔内无活动性出血后，两层关腹并用无菌纱 布覆盖伤口，NC组开腹后仅翻动十二指肠并触摸胰腺数次关 腹。术后BN组股静脉注射BN 组股静脉注射等量生理盐水。各组分别在处理后lh、2h、3h、 6h、12h、24h麻醉并开腹，迅速采集心脏血液和胰腺组织。 采用全自动生化分析仪检测血清淀粉酶。胰腺组织，一部分 立即以冰冷的无RNA酶水冲洗后置于冰上以50～100mg分 装，随即投入液氮速冻，一80℃超低温冰箱妥善保存；另一 部分以中性缓冲甲醛N定(409·LJ)，石蜡包埋切片后HE染色 制片，观察胰腺组织的病理学变化。 3总RNA提取与质量检测：从超低温冰箱取出胰腺组 中文摘要 织样本放入预冷的研钋，迅速加入液氮研磨成粉末，转入匀 浆器，加入冰冷的Trizol试剂lmL，充分匀浆。随后在无菌操 作台内将匀浆液转移到一1．5mL无RNA酶离心管中。加入 无RNA酶离心管内，加入O．5mL的异丙醇，15～30℃放置 10min，2～8℃，12，000 rpm，离心10min。小心移去上清液， 用75％酒精洗涤沉淀两次，每次lmL，7,500 rpm，2～8℃ 离心5min。尽可能