PP2A在ATRA、ATO诱导APL细胞分化和凋亡过程中作用的实验的研究及其ATRA、ATO治疗APL的临床观察.pdf

的临床观察 博士研究生徐喜慧 导师欧阳建教授 摘要 蛋白激酶(proteinkinase。PK)争蛋白磷酸酶(protein 生物体内一对作用相反的酶，蛋白激酶的功能是催化蛋白质的合羟基氨基酸(丝／苏 and 和酪，Ser／ThrTyr)与磷酸形成磷酸酯，而蛋白磷酸酶可以水解磷酸蛋白的磷 酸酯键，从而去磷酸化，细胞内任何一种蛋白质的磷酸化状态是由蛋白激酶和蛋白磷 酸酶活性强弱决定的．细胞中三分之一蛋白的功能是通过磷酸化与去磷酸化互变来实 现的，蛋白质的这种可逆性磷酸化是细胞生命活动的调控中心，参与了细胞的生长、 分化、移行及癌变等全部生命活动．真核细胞内蛋白磷酸化酶主要包括丝氨酸／苏氨 酸蛋白磷酸化酶(Set／Thrprotein protein PP2C，其中PP2A起主要作用． PP2A可以通过水解磷酸蛋白中Set／Thr残基上的磷酯键，使蛋白去磷酸化，从 而参与众多的信号转导途径，包括有丝分裂、转录和翻译、DNA复制及细胞周期的调 控等．许多研究表明PP2A具有抗肿瘤作用．在神经胶质瘤、肺癌等不同实体瘤中， PP2A活性受抑．在恶性血液病中，研究发现慢性粒细胞白血病(Chronicmyeloid retinoic acid，ATRA) 于肿瘤细胞分化与凋亡．研究发现全反式维甲酸(all-trans 诱导HL-60细胞向粒系分化过程中，PP2A蛋白表达下降，活性被抑礼加入蛋白磷酸 酶抑制剂后，细胞分化明显增加；ATRA诱导的乳腺癌细胞凋亡过程中，PP2A活性也 下降． 急性早幼粒细胞白血病(acutepromyelocyticleukemia，APL)是忽挂髓细胞白 Ⅱ 细胞形态学，细胞遗传学和分子水平都有其特点．95％的APL具有特异的染色体易位 t(15；17)(q22；q21)，形成特有的PML／RARo【融合基因．ATRA和AT0是目前治疗APL 最有效的药物． ic NB4细胞株是来源于急性早幼粒细胞白血病(acutepromyelocytleukemia，APL) 是否参予其信号传导需进一步研究．三氧化二砷(arsenic 存在的一种剧毒物质，为中药砒霜的主要成分．对于APL细胞，它具有剂量依赖的双 重活性，低浓度时诱导APL细胞分化，高浓度时诱导细胞凋亡．实验及临床均表明 此是否PP2A在两种药物作用中的参与机制具有不同点呢? 和／或凋亡过程中，及在PP2A抑制剂存在的情况下，两细胞株PP2A活性及其亚基表 述的变化，并探讨PP2A与MR2细胞对ATRA耐药的关系．本研究主要内容包括三个方 缓解方案治疗APL疗效及副作用的差异，并探讨缓解后采用联合ATRA，AT0和化疗的 序贯疗法对患者长期生存的影响． 与耐药的关系 acid， 和NBT还原实验观察细胞形态变化，流式细胞仪分析细胞表面CDIIb表达，丝／苏氨酸 蛋白磷酸化酶试剂盒检测细胞内PP2A活性，Westernblot检测细胞内PP2A各亚基表达． Ill 及流式细胞仪结果均显示，加入Ol【A抑制蛋白磷酸酶活性能促进ATRA诱导-的NB4细胞分 化，并且协同ATRA能诱导其耐药株MR2细胞发生部分分化．③酶活性分析显示，ATRA 下降．(DWostern 耐药的机理之一． 第二部分：蛋白磷酸酶2A在氧化砷诱导的NB4、MR2细胞株凋亡过 程中的变化 对细胞增殖的影响，瑞氏染色观察细胞形态学变化，流式细胞仪测定细胞凋亡率，丝