甘蔗中性／碱性转化酶基因SoNIN1的克隆和表达分析.pdfVIP

作物学报 ACTAAGRONOMICA SINICA 2014，4O(2)：253—263 http：／／zwxb．chinacrops．org／ ISSN 0496-3490；CODEN TSHPA9 E—mail：xbzw@chinajourna1．net．cn DoI：10．3724／SP．J．1006．2014．00253 甘蔗中性碱／性转化酶基因SoNIN1的克隆和表达分析 牛俊奇 1,2 王爱勤 ，2 黄静丽 ， 杨丽涛 ，， 李杨瑞 ，，4， 广西大学农学院，广西南宁 530005；亚热带农业生物资源保护与利用国家重点实验室，广西南宁 530005；中国农业科学院甘蔗 研究中心 ／广西农业科学院甘蔗研究所 ／农业部广西甘蔗生物技术与遗传改良重点实验室 ／广西甘蔗遗传改 良重点实验室，广西 南宁 530007；广西作物遗传改良生物技术重点开放实验室，广西南宁 530007 摘 要：中性／碱性转化酶(Alkaline／NeutralInvertase)能不可逆地催化蔗糖分解为葡萄糖和果糖，在植物生长发育中 起重要作用。本研究采用 RT-PCR和 RACE技术从甘蔗品种GT28心叶中克隆到甘蔗中性／碱性转化酶基因全长eDNA 序列，基因命名为SoNIN1。该基因全长 2289bp(GenBank登录号为JX109944)，开放阅读框为 1812bp，编码 603个 氨基酸，相对分子量为67．79kD，等电点为 6．41。具有中性／碱性转化酶保守结构域，N．端不含跨膜结构和信号肽。其 编码氨基酸序列与玉米、水稻和黑麦草的亲缘关系较近，属于同一进化分支。利用染色体步移技术克隆到SoNIN1基 因5侧翼启动子序列，长度为 1174bp(GenBank登录号为KC854419)。启动子序列含有多个 CAAT-box和 TATA-box 等基本作用元件，参与分生组织特异性激活，参与干旱诱导的MYB结合位点，脱落酸 、茉莉酸甲酯和赤霉素响应等 作用元件。利用实时荧光定量 PCR技术，在生理成熟期甘蔗茎 、叶、花序和芽中均能检测到 SoNIN1的表达，其表达 量在叶中最高，芽中次之，而在+1节问最低。苗期根和叶中SoNIN1基因都受 PEG和NaC1诱导表达。 关键词：甘蔗；中性／碱性转化酶；启动子；克隆；基因表达 Cloning and Expression Analysis ofSugarcane Alkaline／NeutralInvertase GeneSoNINl NIUJunQi，一，WANGAi—Qin，一，HUANGJing．Li，一，YANGLi—Tao，，’，andLIYangRui’，， AgriculturalCollege，GuangxiUniversity,Nanning530005，China；StateKeyLaboratoryofSubtropicalBioresourcesConservationandUtilization， Nanning530005 China；lSugarcaneResearchCenter,ChineseAcademyofAgriculturalSciences|SugarcaneResearchInstiutte，GuangxiAcademy ofAgriculutralSciences／KeyLaboratoryofSugarcaneBiotechnologyandGeneticImprovement(Guangxi)，MinistryofAgriculture／GuangxiKey Laboratory ofSugarcaneGeneticImprovement，Nanning530007，China；Gu~gxiCropGeneticImprovementnadBiotechnologyKeyLaboratory, Nanning530007，China Abstract：Neutral／alkalineinvertaseirreversiblycatalyzessucroseintoglucoseandfructose，andplaysanimportantregulating roleinplantgrowthanddevelopment．InthepresentstudV．thewholelengthofneutral／alkalineinvertasegenecDNA wascloned andsequencedfromleafofsug