PKA对慢性心房颤动患者心房肌细胞SK2通道的调控机制的研究.pdfVIP

嗍 ～～～～ PKA对慢性心房颤动患者心房肌细胞 SK2通道的调控机制研究+ 摘 要 目的：心房颤动(Atrial 常见的持续性心律失常之一，具有较高发病率和死亡率，发病率随年 龄增长而增加。调查研究显示一般人群AF患病率为1％～2％，且AF 患者脑卒中发生率增加5倍，严重影响人群生存质量。目前AF发生 的电生理和分子病理机制复杂，尚未完全阐明。心房肌细胞胞内钙调 控异常及心房肌细胞跨膜离子流的改变而引起的心房电重塑在AF的 conductance 发生和维持中起重要作用。小电导钙激活钾通道(small Ca2+．activated 分布。SK2通道在人与鼠的心房肌和心室肌表达存在差异，在心房肌 表达更为丰富。SK2通道对细胞内游离钙离子[Ca2+】i高度敏感，能够 将[Ca2+】i的变化快速转换成细胞膜电位变化，是近年来AF机制研究 的热点离子通道之一。已证实，AF时心房肌细胞出现钙紊乱，发生 胞内钙超载；另一方面，SK2通道钙离子敏感性增加。因此我们推测 心房肌细胞胞内钙超载及SK2通道钙离子敏感性的变化可能影响 SK2通道功能，SK2通道功能改变参与AF的发生和维持，深入探讨 这些问题对阐明AF发生的病理生理机制具有重要意义。此外，蛋白 kinase 激酶A(ProteinA，PKA)参与了AF时胞内钙紊乱的病理过程， 且对SK2通道的调节作用在表达细胞和神经系统得到充分证明，但 国家自然科学基金资助项目(No 其对心房肌细胞SK2通道的调控作用尚未见报道。本实验主要应用 膜片钳技术观测AF患者心房肌细胞SK2通道功能的改变及PKA相 关途径对SK2通道电流的调节，旨在从细胞水平探讨PKA通过影响 将30 SK2通道功能参与AF电重构过程。方法：(一)电生理实验 10例(细胞n=l 胞的获得：获取体外循环术中切除的右心耳组织，在氧饱和 50U／ml，BSA1 50U／ml，BSA V胶原酶1 mg／m1)，酶II液(V胶原酶1 1 mg／m1)，现配现用。人心房肌细胞SK2通道电流的记录：将急性酶 分离的人心房肌细胞置于全细胞浴液中，选择贴壁良好、折光性强、 表面光滑的单个心房肌细胞作为研究对象，采用膜片钳全细胞记录模 10) 式进行SK2通道的电流记录。所得电流通过膜片钳放大器(EPC 放大，滤波(2 8．0软件进行分析作图。以人心房肌细胞 据，Clampfitl0．1、OriginPro 为研究对象进行实验，实验内容：(1)人心房肌细胞SK2通道电流 通道电流密度及其在混合电流中所占比例的差异。(3)在全细胞膜片 钳模式下观察PKA特异性抑制剂H．89对SK2通道电流的调节作用。 (二)蛋白质水平测定实验SR组和AF组心房肌组织标本分别11 总蛋白及PKA水平。结果：(1)人心房肌细胞SK2通道特性①在 全细胞膜片钳模式下，给予SK2通道电流记录的刺激方案，可记录 mol／L)，加药前后的混合电流相减即可获得SK2通道电流。②在全 细胞膜片钳模式下，10’7 mol／L的apamin能够抑制部分内向整流混 合电流，将apamin洗脱后，能够基本恢复被抑制的电流。分析后结 果显示，本实验记录到的心房肌细胞SK2通道电流具有内向整流特 电流的改变 电极液中钙离子浓度为5×10’7mol／L时，在全细胞膜片 钳模式下记录的AF组SK2通道电流明显大于SR组。在．130mV钳 制电压下，SR组和AF组SK2通道电流密