常压高浓度氧对新生鼠血小板CD62P表达及其脑和肺SOD、MDA的影响.pdf

常压高浓度氧对新生鼠血小板CD62P表达及腑和肺SOD、MDA的影响 常压高浓度氧对新生鼠血小板CD62P表达 及脑和肺SOD、MDA的影响 专业： 儿科新生儿 硕士研究生：杨春晖 导师：苏浩彬副教授 中文摘要 背景及目的 氧疗是新生儿缺氧性疾病必不可少的治疗手段之一。但长时间吸入高浓度 氧对机体、器官有严重的毒性作用。临床应用的高浓度氧主要有常压高浓度氧 (nomlobaric hyperoxia，Nil)和高压氧(hyperbaricoxygen，HBO)两种，前者 应用更广泛。高压氧在理想的剂量下发生中毒的机率较小，而常压高浓度氧疗所 致的潜在或显性氧中毒经常发生[f】。近年来研究认为氧自由基在氧中毒损害中起 重要作用。自由基是最外层轨道上有不配对电子的原子或原子团，性质极不稳定， 正常存在体内有杀灭细菌和寄生虫等作用，但当其产生过多时，使脂质过氧化、蛋 白交联、损伤核酸等引起机体损伤[2】。另外，一些实验研究结果均表明氧中毒时 血细胞、血流速度和血管壁有一定的病理改变，可能是氧中毒的致病因素之一。 CD62P属于黏附分子选择素家族的主要成员【3’4J，正常时存在于静息血小板的a颗 粒膜上，血小板活化时，随活化血小板的“脱颗粒”作用而移位与血小板质膜结合， 成为活化血小板的重要标记物，并介导血小板与粒细胞及内皮细胞的黏附，最终导 致组织损伤‘5“】。CD62P是反映血小板活化较好的指标m。氧中毒的发病机制尚 未完全阐明，血小板的活化是否为氧中毒的发病因素之一，目前尚未见到关于此 方面的报道。 常压高浓度氧对新生鼠血小板CD62P表达及脑和肺SOD、MDA的影响 本实验拟通过建立常压高浓度氧氧中毒的新生鼠模型，用流式细胞仪检测其 全血中血小板膜糖蛋白CD62P的表达，并检测其脑组织和肺组织的SOD和MDA 的含量，探讨氧自由基及血小板活化在高氧损伤中的作用机制，为临床合理用氧 及防治氧中毒提供实验依据。 方法 1．正常健康出生12d时内的昆明小鼠分成高氧组和对照组，每组5窝，每窝 8R。高氧组置于密闭氧箱中，持续输入氧气，氧浓度大于或等于90％，钠石灰 吸收二氧化碳。温度，湿度恒定。每天定时开箱1小时，添加水、饲料及更换垫 料。对照组的小鼠置于同一空气中，饲养方法与高氧组相同。 1：9抗凝，流式细胞仪检测血小板膜糖蛋白CD62P的表达。 3．断头处死后的新生鼠，完整剥离脑组织和肺组织后，取右侧脑组织及右肺 组织制作脑匀浆和肺匀浆，于．30。C冰箱保存待测。最后脑和肺组织匀浆用黄嘌 呤氧化酶法测定SOD，硫代巴比妥酸法测定MDA。 4．左肺和左脑置于10％福尔马林液中保存固定，经脱水、石蜡包埋、切片及 HE染色光镜下观察组织学的改变。 结 果 1．高氧对新生鼠一般状况的影响 新生鼠高氧暴露5天后，有的新生鼠随着每日开箱后氧浓度的下降开始逐渐 出现呼吸急促，皮肤苍白和不同程度的发绀等表现，这些改变出现的时间和表现程 度因个体而不一，但在恢复高氧后基本可缓解。随着高氧暴露时间的延长，越来越 多的新生鼠出现这些离高氧后的异常表现并且程度逐渐加重，严重者在7～10天 后出现头颤，发绀加重，甚至出现下颌式呼吸，恢复供氧后，上述症状虽可有所缓解， 但仍表现出活动少反应差，精神萎靡，毛发欠光泽，吸吮能力差等。而对照组新生鼠 则活动好，反应灵敏，肤色红润，毛发光泽，无以上异常表现。 2．肺的病理改变 高氧组新生鼠在高氧吸入后1天时肺组织与空气组无明显差另tl；3天时可见小 儿 常压高浓度氧对新生鼠血小板CD62P表达及脑和肺SOD、MDA的影响 血管扩张、充血和肺泡内少量出血，以中性粒细胞为主的渗出、问质内细胞增多；7 天时仍可见肺泡内出血、间质水肿、炎症细胞浸润、间质细胞明显增加，有的表 现为肺间隔变薄，有的肺组织正常结构局灶性破坏致肺结构紊乱，同时发现终末气 腔明显扩张、小肺泡数量减少，提示肺的正常分化发育受阻