畅肺防喘方对哮喘大鼠气道重构和炎症介质的影响的试验的研究.pdfVIP

中文摘要 目的 畅肺防喘方是课题组多年来治疗哮喘的经验方，应用于临床疗效 显著，该方能有效缓解患者支气管痉挛，提高患者生活质量。其免疫作用 已有初步探索。本课题拟在前期临床观察和实验研究的基础上，进一步从 分子生物学和免疫学水平，研究畅肺防喘方防治哮喘的作用机制。本课题 通过体外实验，运用血清药理学方法，研究该方对支气管平滑肌细胞的抑 制增殖作用；并通过体内实验，观察该方对哮喘模型大鼠的平喘作用和对 其支气管、肺组织形态学的影响，研究其血液、肺泡灌洗液中EOS(嗜酸 ICAM-1(细胞间粘附分子一1)表达水平的变化。进一步从细胞和分子生物 学水平探讨畅肺防喘方治疗哮喘的作用机理，从而为开发临床防治哮喘的 有效中药制剂奠定基础。 方法 1、体内实验方法：取大鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)进行细胞计数 和分类，对其上清液以双抗夹心酶联免疫吸附(ELISA)法进行细胞因子 量；制备大鼠支气管及肺组织切片，HE染色，观察气道重构情况；免疫 方法：含药血清制备；MTT酶标法、免疫细胞化学(ICC)法测支气管平滑 肌细胞的增殖水平，以了解该方对抗哮喘气道重构的作用。 结果 1、体内试验：1．1实验结果显示畅肺防喘方可显著降低WBC数量， 尤其是嗜酸性细胞(PO．01)，说明该方可明显改善呼吸道炎性症状。实验 结果还表明血清IgE的含量降低，说明其治疗和预防作用可能是通过此途 径来实现的，为畅肺防喘方治疗支气管哮喘的临床应用提供了有力的实验 依据。 1．2ELISA法结果显示：与正常组比较模型组支气管肺泡灌洗液中 方对EOS的抑制作用较为明显。EOS浸润是哮喘炎症的显著病理生理特 征，EOS向炎症部位趋化、募集，是哮喘病症中重要的病理过程，其过程机 制作用可能是畅肺防喘方治疗哮喘的作用机制之一。 1．3肺组织病理切片HE染色显示，抗原激发后模型组肺组织嗜酸性 粒细胞和炎症细胞浸润与对照组相比有明显增多(P0．01)。 2、体外实验：本实验发现畅肺防喘方高、中、小剂量组含药血清对 支气管平滑肌增殖细胞核抗原(PCNA)表达的平均光密度明显高于对照组 致。本次实验证明，与对照组比较，畅肺防喘方高、中剂量含药血清组能 明显抑制大鼠支气管平滑肌细胞(ASMC)的增殖，与地塞米松含药血清组 比较无显著性差异，而畅肺防喘方小剂量含药血清组则无明显作用，考虑 可能与药物浓度有关。且随着作用时间的延长，含药血清对支气管平滑肌 s) 细胞的抑制作用有增强趋势。说明畅肺防喘方可能通过抑制组胺(Hi 促ASMC增殖作用而达到防治哮喘的效果，且存在一定的剂量、时间依赖 关系。 结论 1、体内实验：证实了畅肺防喘方的平喘作用(症状改善，血中IgE、 趋化因子Eotaxin和粘附分子ICAM-1的表达)。 2、体外实验：运用血清药理学方法证实了畅肺防喘方有较好的抗哮喘大 鼠气道重构的作用(抑制支气管平滑肌细胞增殖)和抑制平滑肌细胞的 PCNA的作用。 3、明确了宣肺平喘、清热化痰法对哮喘的防治作用机制。 4、为进一步开发具有较好疗效的中药复方制剂，提供了实验依据。 关健词畅肺防喘方；哮喘；实验研究，i Ⅱ studiestotheairfiue Experimental reconsteuctand mediuminfluenceof asthma big mouseforthe Fei prescriptionChang Fang ChuanFang inicalbasiS forChinese Speciality：Cl medicine Author：Xiangxixiong Tutor：zhao yingqian Abstract ive object Th