基于全自动毛细管电泳技术建立的单核细胞增生李斯特氏菌MLVA分型方法.pdfVIP

中国人兽共 患病学报 2015，31 (9) ChineseJournalofZoonoses 839 DOI：10．3969／j．issn．1002—2694．2015．09．012 基于全 自动毛细管电泳技术建立的 单核细胞增生李斯特 氏菌 MLVA分型方法 李秀娟 ，崔玲玲 ，赵 冬 ，潘 琢 ，高伟利 摘 要 ：目的 建立针对食 品来源的单核细胞增生李斯特 氏菌(Listeriamonocytogenes，Lm)分离株 的多位点串联重复序 列分型(Multiple—LocusVariablenumbertandemrepeatAnalysis，MLVA)方法，为暴发确认和溯源检测提供实验室支持 。方 法 对 2005--2014年 间分离 自食 品的 91株 Lm进行 l4个可变数 目串联重复序列(VariableNumberofTandem Repeats， VNTR)位点的检测，评估最优检测位 点组合并分析检测结果 。结果 通过采用软件分析 ，由LMV1、LMV2、LMV7、Lml0、 Lm11、Lm23、LM—TR6、TR3和 Lm15等 9个 VNTR位 点组成的位 点组合为最优 MLVA检测位 点，可 以将 91株 Lm 分离株 分为7O个型别 ，分型能力达到0．9871。结论 本研 究建立 的基于全 自动毛细管电泳的 由9个检测位点组成 的Lm 的MLVA 分型方法 ，具有操作简便 、快速 、结果客观 、操作标准化 、易于在不 同实验室 间比较的优势 ，可作为一线检测方法用于李斯特菌 病 的暴发确认和溯源检测 。 关键词 ：单核细胞增生李斯特氏菌；多位 点串联重复序列分型；毛细管 电泳 中图分类号 ：R378．99 文献标识码 ：A 文章编号 ：1002—2694(2O15)09—0839—06 Developmentofamultiplel‘ocusvariablenumberoftandem repeattyping methodforListeria，咒D Dc og upon thecapillaryelectr0ph0resis LIXiu—juan ，CUILing—ling。，ZHAODong ，PAN Zhuo ，GAOWei—li (1．DepartmentofMicrobiology，S^ gCenterforDiseaseControlandPrevention，S n ^“ng050011，China 2．HebeiNormalUniversity，S Jn “丑g050000，China) Abstract：Inordertodevelopamultiple—locusvariablenumbertandem repeatanalysis(MLVA)methodforListeriamono— cytogenes (L． 20，2oc ￡Dg8es)，atotalof14variablenumberoftandem repeats (VNTR)lociwereused todetectthe91 L．monocytogenesisolatedfrom food．Resultsshowedthattheoptimalcombinationoflociconsistedof9 loci(LMV1，LMV2， LMV7，Lml0，Lm11，Lm23，LM-TR6，TR3，Lm15)，whichproducedthehighlevelofdiscriminatoryabilitywithSimpson indexof0．9871forfoodborneL．monocytogenes，coulddivided91L．monocytogenesisolatesinto70subtypes．Thismethod requiredonlyoneconventionalPCR followedbyautomatedcapillaryelectrophoresis，providinghighdiscriminatoryability． It wassimple，e