动态激光散射测纯化蛋白粒径及对粒径与分子量关系的研究.pdfVIP

动态激光散射测量纯化蛋白粒径及对粒径与分子量关系的研究 动态激光散射测量纯化蛋白粒径及对粒 径与分子量关系的研究 专业：生物医学工程 硕士研究生：易皎鹤 导师：贺奇才副教授 摘要 生命现象是物质运动的最复杂形式，在对生物样品研究过程中，经常要研 究生物样品的组分、各组分物理化学性质及其功能．在生物化学和分子生物学 中，常将生物样品中的生物大分子分离开来进行研究，常用的分离技术主要有： 离心技术、电泳技术、层析技术．这些技术的应用，对分子生物学研究起到了 重要作用．但这些技术都是将生物样品的各组分在较强的外力(离心力、电场力、 吸附力等)作用下分离的．然而运用动态激光散射技术在生物大分子溶液性质研 究方面的应用越来越广泛，在某些方面如蛋白质分子的缔合、聚集等研究中是 其它手段所无法比拟的．作为经典的静态光散射方法，它可以测得大分子的重 均分子量廊、旋转半径R。以及第二维利系数爿2等重要参数．特别是近十几年来 发展起来的动态光散射方法，可以测得光强的时间相关函数，从而可得到大分 子的平动扩散系数万及流体力学半径R。．该技术具有不破坏样品所处的环境 状态，能快速跟踪体系的变化过程等优点，这对于研究生物大分子的溶液状态 行为特别适用．举例来说，确认新的治疗蛋白、诊断蛋白和抗体的粒径及粒径 分布是使其得到认可的重要的研究和产品参数．蛋白和抗体在不同的温度、PH 值、离子浓度和溶液浓度下其聚集情况会随之不同，即蛋白和抗体的聚集是温 度、PH值、离子浓度和溶液浓度的函数．并且就算很小量的蛋白分子的聚集都 是很重要的，因为其聚集将改变分子结构的构象从而影响其作为有效的治疗和 诊断蛋白的特性． 本课题主要建立了一套动态激光散射装置，对测量光路进行了调试校准； 动态激光散射测量纯化蛋白粒径及对粒径与分子量关系的研究 对动态激光散射原理进行了分析，对数据分析方法进行了比较；就动态激光散 射技术在生物大分子颗粒粒径及其分布、分子量与粒径之问的对应关系等多个 方面的研究应用进行实验和讨论，通过对纯化蛋白样品的测试，并且结合相应 的数据分析方法从而得出适合于测试纯化的蛋白样品的数据分析方法，与传统 的纳米颗粒测试相比，该研究是专门针对于生物大分子的，我们预期通过这种 针对性的研究，将进一步提高生物大分子体系中样品粒度及其分布的测量结果 的可靠性和精度． 实验仪器和数据处理： 实验采用自主建立并装配的一动态激光散射装置，动态光散射(DLS)是利 用处于布朗运动中的生物大分子、分子集团或颗粒的散射光的强度随时问而波 动的情况，来分析其在溶液中的粒子大小、尺寸分布等聚合方面性质的．散射 光强度的波动用自相关函数来分析，分析软件提供单指数分析方法(Exponential sampling)、累计分析方法(CumulantAnalysis)、双指数分析方法(Double ConstrainedLeast Exponential)、非负约束的最小二乘分析方法mon--Negatively Squares：Multiple ConstrainedLeast 的时间相关函数为： G(2’(力刊(1+触q磅|2) 爿为基线，理论上为1．0，卢为仪器常数，沩衰减时间，散射向量q=掣sin(6}2)， It． 为折射率，纳散射角．从自相关函数的衰减率可以直接得到平移扩散系数D， 流体动力学半径RIJ可由D通过Stokes．Einstein方程导出舶2 ik；n面T，其中拓为 波尔兹曼常数，功绝对温度，，7是溶液的粘度． 实验样品与试剂： 聚苯乙烯微球水悬浮液购自中国石油大学重质油国家重点实验室，用于校 正光路．纯化的马血清球蛋白和纯化的卵黄抗体由公共卫生学院流行病与卫生 统计学教研室提供． 动态激光散