癌基因TRE17与细胞骨架蛋白MLC2和β-Tubelin相互作用的初步研究.pdfVIP

中文摘要 中文摘要 初步研究 东南大学医学院病理学与病理生理学系 研究生：王丛阳 导师：沈传陆教授 目的： 多种肿瘤如平滑肌肉瘤、横纹肌肉瘤、骨肉瘤、前列腺癌、乳腺癌、肾癌和膀胱癌中高表达， 3T3发生恶性转化。细胞骨架是真核细胞中的蛋白纤维 其过量表达可使止常成纤维细胞NIH 网架体系，细胞骨架发生异常，可造成细胞黏附能力下降、运动能力增强等，引起细胞恶性 转化为肿瘤细胞，导致肿瘤的发生。为了阐明TI也17的功能和其导致细胞恶性转化的机制， 为人类肿瘤的诊断、治疗提供新线索，我们初步探讨n也17与细胞骨架蛋白MLC2、pTubulin (TubB2C)之间的相互作用。 方法：．’ ： 为研究癌基冈TI也17与细胞骨架蛋白MLC2、p-Tubulin相互作川，我们先将原核表达 在非变性条件下(1％NP40裂解液和超卢破碎仪)裂解细菌菌体，再分别将GST、GST- MLC2和GST．，rubB2C蛋白用Glutanlione4B进行亲化。 S印harose Kcl、2mMEDl’A、5mM Tris．HCl(pH8．0)、150mM DTT、lO％(v／v)甘油、蛋白酶抑制剂)， 胞裂解物进行GST Blot分析，以检测沉淀中的 pull．down分析，用抗HA抗体进行weStenl HA．Tl辽17蛋白。 结果： II 中文摘要 4B进行亲和纯化后，纯度可达90％。 S印harose 截短体转染培养的HEK293细胞裂解物进行GSTPull司own实验后，用抗HA抗体进行 Westem 酸以内。 结论： 1．本实验通过体外表达和纯化GST和GST-MLC2蛋白，用GSTPull—down实验证实TI冱17 癌蛋白能特异性结合MLC2蛋白，结合区域可能位于n也17氨基端的174个氨基酸以内； nlll．do、)v11实验初步证实 2．本实验通过体外表达和纯化GST和GST-TubB2C蛋白，用GST TREl7癌蛋白能特异性结合beta微管蛋白2C。 关键词：TI辽17癌蛋白：MLC2；TubB2c；蛋白相互作用 英文摘要 Abstract Identification0fTREl7 Primary InteractionwithMLC2and oncoprotein p—TIubulin of and Departmentpathologypathophysiolo斟 of SchoolMedical Science，Southeast Universi坶 SHENChuan—Lu WangCong一1yang objective： TREl7 identi6edina sarcoma the