草鱼(Ctenopharyngodon+idella)Hsp90、Wap65基因的克隆、表达特性及功能分析.pdfVIP

摘要 草鱼(Ctenopharyngodon 短暂诱导后，其表达水平有一定的上调。为了解CiHsp90的功能，一方面，克隆 验。另一方面，原核表达、纯化获得该目的多肽P朋Pasc，将n册敬进行柠檬酸合成 酶凝集实验。CiHsp90除了对大肠杆菌有冷，热保护作用外，在高温状态时能够降 低柠檬酸合成酶的凝集程度。 Wap65是机体参与温度调节和免疫应答反应的一种应激蛋白，它在鱼类适应 I：C诱导的草鱼肝肾eDNA文库中筛 变温生活等方面起重要作用。本文在经Poly 的表达特征，结果表明：Wap65在肝中有较强的本底表达，而在脾、肾、脑和肠 等组织中该基因表达非常微弱。34C热激2h后，在脾脏中，Wap65的表达量有一 定的上调；在肝脏中该基因的相对表达量大量增加，而在其他受检组织中Wap65 的表达无明显变化。PolyI：C诱导以后，在脾脏中，Wap65的表达量有一定的上调； 在其他受检组织中无明显变化。LPS诱导以后，在受检组织中的表达量都下调。 关键词：Hsp90；ATPase结构域；Wap65；应激蛋白 Abstraet Abstract The was grasscarp(Ctenopharyngodonidellus)Hsp90gene clonedfrommixed liverand cDNA full of kidney library(CiHsp90，GU258544)．Thelengthsequence 5untranslated whichWas2793 a of104 anda3untranslated bp，contained region bp was of292 frame2397whichcouldcodea798amino region bp．Theopenreading bp acids ofthededucedaminoacid indicatedthatthemature peptide．Analysis sequence anATPase RT-PCR showedthat peptidepossessed domain(96-255aa)．The analysis was atlowerlevelsinalldetectedtissuesand CiHsp90ubiquitouslyexpressed afterheatshockat34℃．Tounderstandthe up—regulated functiontheATPasedomainof inthermal vector itseDNAwas CiHsp90involving protection，anexpressioncontaining inE．coli transferfrom37℃to cells expressed BL21(DE3)plysS．Upon42℃，these thataccumulated oftheATPase PATPase(recombinantpeptide thermoresistancethancontrolcells．Whileincu