白眉蝮蛇蛇毒L-氨基酸氧化酶的表征.pdf

白眉蝮蛇蛇毒L．氨基酸氧化酶的表征 硕士生姓名： 郭春梅 指导教师： 刊、明忠教授 指导小组： 刘淑清教授 专业名称： 生物化学与分子生物学 摘要 蛇毒(SV)是由多种生物活性多肽、蛋白质、核苷、胺和金属离子等组成的复杂 混合物。L．氨基酸氧化酶(LAAOs)作为蛇毒中的一个重要成分，有着多样的生物学 活性，其通过催化氧化L．氨基酸产生过氧化氢(H202)赋予蛇毒一定的毒性。目 前，从蛇毒中分离得到的LAAOs以数十计，大量研究结果表明，蛇毒L．氨基酸氧 化酶(SV-LAAOs)可诱导或抑制血小板聚集、刺激水肿形成、诱导出血或溶血， 具有抗凝活性、细胞毒性、抗病毒、抗肿瘤、抗血栓、抗菌消炎、抗利什曼原虫、 诱导细胞凋亡和抗HIV活性等多种生理作用。SV-LAAOs是一个新的毒性蛇毒蛋 白群，是非常有趣的一类活性物质，具有潜在的药物开发价值和临床应用前景。 采用离子交换、凝胶过滤层析及高效液相色谱层析从长白山白眉蝮蛇 (AgkistrodonblomhoffiiUssurensis)蛇毒中纯化了一种L．氨基酸氧化酶，命名为 mass 上显示单一泳带，结合基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI．TOF kDa的二聚体。Akbu-LAAO经胰蛋白酶胶内酶解，产生的肽段经高效液相色谱． Bioworks软件完成，质谱鉴定得到了1 KFWEDEGIHGGK， IKFEPPLPPK， VTVVYQTPAK，HDDIFAYEK， 、 FDEIVGGMDK、RFDEIVDGMDK、 FDEIV SAGQLYEESLGK russellii siamensis和Trimeresurus has,Daboia 有同源性，但比对分析表明Akbu．LAAO是一种新的蛇毒LAAO。采用辣根过氧化 2．1mM。电感耦合等离子体原子发射光谱法(ICP．AES)检测结果表明每个 对Akbu．LAAO的水解活性不是必需的，但有助于维持酶结构完整性。外源金属离 小板的聚集有一定抑制及解聚作用，但抑制作用有显著差别，以动物血小板代替 人血小板进行类似实验有一定风险，结果表明Akbu-LAAO在治疗心血管疾病方面 将起到一定的作用。Akbu-LAAO能够显著抑制金黄色葡萄球菌生长，是相同条件 下头孢类药物剂效的18倍，可作为潜在的抑菌剂使用。 总之，本论文采用四步层析纯化方法从长白山白眉蝮蛇蛇毒中分离得到了一 种新的天然的LAAO，具有一定潜在的药物开发价值和临床应用前景。对 进一步开发和应用奠定了一定基础。 关键词：L．氨基酸氧化酶 白眉蝮蛇蛇毒表征 2 CharacterizationofanewL．．aminoacidoxidasefrom ussurensissnakevenom Agkistrodonblomhoffii Master candidate：GuoChunmei degree Sun Supervisor：ProfessorMingzhong Liu Vice．supervisor：ProfessorShuqing andMolecular Biology Major：Biochemistry