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摘要
摘要
l乙醇脱氢酶2和乙醛脱氢酶的表达及酶学性质分析
酿酒酵母中的乙醇脱氢酶2催化乙醇氧化生成乙醛，乙醛脱氢酶催化乙醛
氧化生成乙酸。本研究从酿酒酵母基因组中分别克隆、表达乙醇脱氢酶2和乙
醛脱氢酶，对其进行了纯化，然后体外测定酶活及酶动力学分析。为研发新型
解酒食品提供理论基础。主要内容如下：
1．1从酿酒酵母基因组DNA扩增获得6种酶的基因并构建了6个表达
和pRX2-ALDH5，分别转化E．coliBL21，通过乳糖自诱导表达目的蛋白，6
种酶得到成功表达，但ADH2和ALDH4主要以包涵体形式表达；
仍然以包涵体形式表达；
1．3采用Ni．NTAHis．Bind
Resin亲和层析柱纯化带有6His·Tag的重组蛋
mg／mL，1．624mg／mL，0．6635mg／mL，0．7596mg／mL和0．9615mg／mL：
1．4体外测定复性后的ADH2和纯化得到的乙醛脱氢酶活性，通过紫外可
见分光光度计测定产物[3-NADH和州ADPH的生成量，结果显示ADH2、
U／mg，1．416U／mg，1．566U／mg和2．742U／mg；
1．5研究温度、pH值和金属离子对ADH2和乙醛脱氢酶活力的影响。得
300C，370C，37。C和50。C，最适pH值分别为7．4，7．4，8．0，7．4和8．5。
1．6研究ADH2和乙醛脱氢酶酶动力学性质。ADH2对NAD+和乙醇的
和氨基丙醛的Km分别为(47l州，17．59M)和(4109M，8．6州)。
摘要
关键词：乙醇脱氢酶；乙醛脱氢酶；基因表达：亲和层析；酶动力学；
2两种抗菌肽的克隆、表达及活性分析
摘要将两种水生动物分泌的抗菌肽基因克隆到原核表达载体pGEX．4T-l
主菌Escherichiacoli
Rosetta中进行表达，表达的融合蛋白主要以包涵体形式存
在。融合蛋白经复性、酶切处理获得抗菌Y18和CECI。抑菌实验结果表明，
coli
DH5a、Bacillus
subtilis、Staphyloccocus
cerev括iae的生长。为后续的将抗菌肽基因序列串连单体的形式高量表达实验奠
定了良好的基础。
关键词抗菌肽；融合蛋白；包涵体；抑菌活性
Ⅱ
ABSTRACT
1 2
Ex[ anandCharacterization≯山H2naraCterlZanonpULJHandAL．UHALDHoI“
cerevisiae
Saccharomyces
Alcohol and havebeen as
dehydrogenasesAldhydedehydrogenasesemerging
crucial inethanol conversionof toaceticacid．in
enzymes through acetaldehyde this
andALDHshavebeenclonedand as
study，ADH2 genes purifiedhistidine-tagged
fusion wereassaied act invitro．Thesedata
protein．Theseenzymes enzymaticivity
new
werelaidatheoreticalfoundationfor food．Themaincontentsareillu
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