褶纹冠蚌过氧化氢酶基因克隆、原核表达及酶活性分析.pdfVIP

摘要 摘 要 频繁受到病害的影响，对其育珠能力产生了极大的影响。本文对褶纹冠蚌过氧化 氢酶(cpCAT)的eDNA进行了克隆与原核表达。 cDNA全长。该基因 本文利用RACE．PCR及同源克隆方法，克隆出cpCAT 全长为4863 cDNA全长为2618 bp，且有3个外显子，2个内含子。cpCAT bp，其 中编码区1503 bp，5’端不翻译区136bp，3’端不翻译区979bp，具有典型的腺苷 序列和动物，植物，细菌的CAT基因有很高的同源性。cpCAT无信号肽，存在过 7 氧化氢酶近端活性位点(61FNRE砌PERVVHAKGAG7)和过氧化氢酶近端血红素 系统发育树结果表明褶纹冠蚌与栉孔扇贝(Chlamysfarreri)过氧化氢酶基因的亲 缘关系最近。 · 利用RT-PCR‘分析检测cpCAT基因经注射嗜水气单胞菌后的表达情况，结果表 明在注射嗜水气单胞菌后，在血液、鳃、外套膜、闭壳肌和肝脏中都有表达，且 在肝脏中的表达量最高，且各个组织中cpCAT基因的表达明显增加，12h后达到 最大值，随后表达有所下降，到48h后恢复至原有水平。结果表明褶纹冠蚌在受 到病害后，其体内的过氧化氢酶具有防御作用。 根据开放阅读框设计带酶切位点(KpnI和EcoRI)的引物，构建重组表达质 大肠杆菌(Escherichia KDa。 Urea 处理时，酶活性保持80％以上。随着变性剂浓度的增加，cpC-AT酶活力逐渐降低。 关键词：褶纹冠蚌，过氧化氢酶，基因克隆，原核表达、酶活性 ¨ Abstract ABSTRACT Cristariaisoneofthemost mussel’’inour plicata important‘‘Freshwaterpearl Cristariaisvulnerabletodisease makes country．Butrecently plicata frequently,which a influencetothe ofthe catalasecDNAofC great ability pearl．The plicata(cpCAT) clonedandthefull was inthe was length Prokaryotic expressed、Ⅳitll expressionpaper． full and The cDNA hasbeencloned cpCAT sequence usinghomologouscloning RACE-PCR．Theis4863 andhasatotaloftwointronsandthreeexons． gene bplong Inaddit