苹果属小金海棠铁胁迫相关基因的克隆和表达分析.pdfVIP

苹果属小金海棠缺铁胁迫稿关基因 的克隆和表达分析 曹冬梅 (中瓣农盈大学霆艺慈穆磷究斯，恕京100094) 摘 要 苹果悬我国栽培面积昂太的经济树种，但缺铁黄叶瘸严重地限制了苹果的大规模生产和就经 济产量。嚣{嚣硬究窝毙隆蘸钦耱遥稷笑基露不投秀进一步磺究挚累壤坟、转运铁黪分子规割提供 熬础。其次。在提商植物对铁胁迫抗性的遗传育种中，可以利用蔟因工程技术，将铁胁迫相关基 嚣整合囊终秘染色髂薹毽缀审，毓两达戮有效控麓羲蘩棼懿磊熬。 Jiang)为试材，利用玉米Fe(II)转运 本试骏以苹果属小金海棠(MalusxiaojinensisChenget 蛋囊基因嚣段爨及小麦金震反凌元符结合蛋自TaMRE-BPcDNA兔搽铮，簿选垂鑫海寨簸铁禳 eDNA表选文库，目的在于克隆苹果铁高效基因型小金海棠的Fe Of)转运磷自基因以及与缺铁胁 遗稽关静结合蛋自燕因。主簧结莱翔下； 个商代表性的克隆谶行测序分析。 同长度的纂因片段，是同一个基因。 明山定子和珠眉海棠基因组DNA中也存在类似躲因。 袭达，且随缺铁处理装达量加强，特别是缺铁6天的根系RNA杂交信号最强，由此也可以推i911|，小 金海棠Fe(11)转运鬣癌基墨对缺铁胁遗酶痊。 5、用小麦金属反应元件TaMRE*BP cDNA作探针，筛选小愈海棠缺铁根cDNA表达文库， 避过砖约120000Pfu鲍文蓐避行三耱簿选，共获得10个麴牲竟鼹；选其中片段较长豹两个觉隆 _j矬行5’端测序，结果表明：两个克隆所编码的蛋白均与拟南芥的一个MYB蛋国具有高度同 淡缝，葳孛选撂片段最长熬～个克建(定名势MxMybl)进孬垒黟列溅寇。 ll 个氨基酸，推测其分子量为33．2KD．是一个具有完整阅读框的全长的MYB类转录因子基因。 外，其C端和N端几乎没有同源性。MxMYBl蛋白的c．端还含有一个富含脯氨酸区，这样的结 构基序可能具有激活转录的功能。 在小金海棠基因组DNA中是单拷贝。实验中为了避免由于保守的MYB结构域而造成该基因和 同类转录因子的杂交，所用探针仅用MxMybl基因C-端的特异性片段。 结果如下：MxMybl在根系和叶片中均表达，缺铁处理可以加强MxMybl在根系中的表达。尤其 是缺铁3天的根系表达量盛强。 9、对转录因子MxMybl基因进行原核表达载体的构建及其蛋白的原核表达。构建的原核表 达载体结构正确，未出现碱基突变及移码现象：lmmol／LIPTG．诱导2h后。在预期的蛋白分子量 约38kDa处出现一条表达加强的蛋白带。为进一步目的蛋白的纯化和鉴定提供试验基础。 关键词：苹果属小金海棠。Fe(II)转运蛋白基因，转录因子MxMybl，表达模式，原核表达 111 of and RelatedGenesunder ExpressionAnalysis Cloning in StressMalus Fe—deficiency xiaofinensis Cao Dongmei forHorticultural (Institute Plants，ChinaAgriculture University,Beijing100094，China)