猪MHC-Ⅰ α生物素化序列融合基因的构建、表达与纯化.pdfVIP

维普资讯 456 中国兽医学报 20O8年4月 第28卷 第4期 Chin_， Apr．2008Vo1．28No．4 猪 MHC．IID【生物素化序列融合基因的构建、表达与纯化 肖一红 一，刘光亮 ，‘一，王 群 ，-，童铁钢 ，一，白 宇 -一，孟庆文 ，‘一，吴东来 ， (1．中国农业科学院哈尔滨 兽医研究所 兽医生物技术国家重点实验室，黑龙江 哈尔滨 150001，2．中国农业科学院研究生院，北京 100081) 摘要：采用RT-FCR技术从猪外周血单核细胞 (PBMC)中获得猪 白细胞抗原基 因座P1、P14等位基因的胞外区，并在 其3端拼接上依赖BirA酶的可生物素化序列 (BSP)，构建了pET-P1．BSP和pET-P14-BSP高效表达载体并进行诱导 表达和纯化，用SDS和Westernblotting法对表达产物进行鉴定。结果显示，成功构建了融合表达载体 pET-P1． BSP和pET-P14-BSP，表达产物以包涵体的形式存在，获得高纯度的P1．BSP和P14-BSP蛋白，为进一步利用亲和素在 体外构建SLA．I类分子肽四聚体奠定了基础。 关键词：MHC—I；SLA—I；克隆；生物素化序列；表达；纯化 中图分类号：Q78；$852．4 文献标识码：A 文章编号：1005．4545(2008)04-0456-05 Cloning，expressionandpurificationofswineMHC-I仅-BSP (SLA-I)inEs- cherichia coli XIAOYi．hong一，LIUGuang—liang ，WANGQun ，TONGTie．gang ，BAIYu，一，MENGQing-wen，‘一，WU Dong-lai (1．NationalKeylaboratoryofVeterinaryBoitechnology，HarbinVeterinaryResearchInstituteof CAAS， r6 15001，China ；2．GraduateSchoolofCAAS，8e~．g 100081，hCina) Abstract：ExpressionvectorcontainingfusionproteinofP1·B·SPandP14--BSPwasconstructedtoobtainpuffiedproteinfor theassemblingofswineleukocytenatigenclassI(SLA—I)，majorhistocompatibilitycomplexproteinclassI-peptidetetramer． Thexetracellulardomainsoftwoloci(PlnadP14)ofSLA-1wereclonednadsequencdefromswinePBMCbyRT-PCRnadBirA substratepeptide(BSP)sequence惴 addedtohte3’endofP1nadP14genes．Thenhteyweresubelonde intopET-28a(+)vcetor nadexpressedinBL21(DE3)．TheexpressedfusionproteinsP1-BSPnadP14-BSPwerepurifide nadidentifide using SDS nadWestern Blotting ．Resultsshowde hteP1一BSPnadP14-BSPfusionproteinwere successfullyexpressednadpurifide ．Thees lay htefoundationofrhteconstructionofSLA—Icomplextoxeplorehtecell—mediatde immunityofhteswine． Keywords：MHC-I；SLA-I；cloning；BSP；expression；purification 猪 的 MHC．I，又称猪 白细胞抗 原 I(Swine