ⅰ群禽腺病毒灭油乳剂苗的研究.pdf

I群禽腺病毒灭活油乳剂苗的研究 摘要 本研究使用了过滤法及蔗糖梯度密度离心两种方法制备了I群禽腺病 毒血清1型(FAV一1)全病毒作为包被抗原，分别建立了检测I群禽腺病毒抗 1inkedi姗unosorbent 体的两种间接酶联免疫吸附试验(enzyme assay， 血清稀释至6400倍及12800倍时，结果仍为阳性；检测禽流感病毒、新城 疫病毒及禽乎肠孤病毒阳性血清结果均为阴性，重复试验变异系数均小于 5％。 应用两种ELISA方法同时检测了FAV—l灭活疫苗抗体水平及临床检 查，比较结果表明：过滤法ELISA在相同抗体水平上OD值平均高出26．46％， 在低水平抗体的检测上具有更高敏感性。本研究建立的诊断方法具有良好 的特异性、敏感性和重复性，为I群禽腺病毒免疫鸡的抗体监测和I群禽 腺病毒流行病学调查提供了一种快速、简便的血清学诊断方法。 为研制禽I群腺病毒血清1型(FAV一1)油乳剂灭活疫苗，本实验室以 FAv一1为种毒，进行了病毒增殖条件的优化，确定该病毒最佳接种剂量为 10毛4 ELD。。／mL、 TCID。。／InL，最佳收胚时间为72—96h。获得病毒EL跣为10吼31 的抗原液制备成油乳剂灭活苗。比较了甲醛及B～丙内酯的灭活效果，确定 甲醛灭活终浓度为O．1％，BPL最佳灭活终浓度为O．05％倍稀释。 进行疫苗成分最佳配比的优化，最后确认HLB7．O，乳化剂含量lO％， 油水比为4：1的比例能提供最佳稳定性及免疫效果。剂型检验、稳定检测、 粘度测定、无菌检验、安全性检测及保存期检测均达到成品疫苗所需要求， 最小免疫剂量为O．25ⅡlL。 疫苗免疫抗体水平的监测结果为在免疫后的第2周开始进行免疫抗体水 平的检测。在免疫后的第4周，也就是免疫后的第28天，免疫鸡组的抗体 水平达到了最高峰ELISAOD4翮O．96．而从免疫后第4周开始，抗体水平缓 慢滑落，在免疫后第八周时维持ELISA OD4∞O．73l的水平。根据免疫攻毒 试验中免疫攻毒鸡的排毒及发病率判定，本课题所研制疫苗对免疫组鸡的 保护率为loo％，达到完全抵抗病毒的攻击。 田间动物试验表明该疫苗在免疫初期FAV一1油苗抗体水平ELISAOD伽 可达1．103，达到预期免疫抗体水平，且在免疫后4个月内保持高效价 (O．836)。而在免疫后5个月抗体水平出现滑坡，到免疫后6个月时保持 在中等水平(O．595)。该苗对于免疫不同品种和年龄的鸡使用安全有效。 关键词：I群禽腺病毒血清l型；间接ELISA；灭活油乳剂苗 H I ADENOVIRUSGRoUPSERUM THESTUDYoFFoWL VACCINE lVIRUSINACTIVATEDOIL．EMULSIoN TYPE ABSTRACT fordetection觚d of Two协dnct-ELIsA quantificationIgG assays was I l(FAUl)iIlsemm f．o、讥adenovims antibodyagaillst