乌拉尔甘草afp遗传多样性及离体培养技术研究.pdfVIP

中文摘要 乌拉尔甘草(G≯掣肭￡z口咿口彪m捃Fisch)属于豆科(￡曙“m栩os口e)甘草属 (GfyF炒施招口)灌木状多年生草本植物，是荒漠半荒漠地区重要的防风固沙植 物，既有重要的药用价值，在食品、饮料、卷烟、化妆品等工业中也有着重要 的作用。由于对野生资源的毁灭性采挖，造成种群数量减少，遗传多样性受到 严重威胁，开展对野生乌拉尔甘草遗传多样性和植物组织培养技术研究对于资 源保护和人工栽培育种具有重要的理论和实践意义。本文利用AFLP标记分析 了来自我国乌拉尔甘草主产区共18个野生种群的遗传多样性，并对愈伤组织的 诱导、状态调控、离体再生、徽繁体系建立以及有效成分甘草酸和黄酾的合成 和积累进行了研究．结果如下： 1．筛选了15对条带清晰、多态性丰富的AFLP引物组合对18个野生乌拉 尔甘草种群360个单株共扩增出759条谱带，其中多态性带527条，占69．43 ％，平均每个位点有35．1个等位变异。 2．野生乌拉尔甘草具有一定的遗传多样性水平，Nei’基因多样性指数在 O．28之间，平均为O．39；宁夏地区种群遗传多样性水平最高，其次为内蒙古地 区、新疆地区、黑龙江地区和山西地区，甘肃酒泉种群的遗传多样性水平最低。 供试18个种群中，遗传变异最丰富的是宁夏灵武种群。18个供试种群遗传相 0．1556。利用uPGMA聚类将供试18个群体划分为4类，聚类结果表现出明显的 地域性。 3，建立了适合乌拉尔甘草组织培养物中总黄酮提取和含量测定的工艺方 法，以75％甲醇为溶剂、浸泡6小时、在32℃下超声提取5分钟2次，以甘草 苷为对照品利用碱性比色法进行测定，该体系稳定性和重复性均较好，回收率 在95％～101．4％。 4．适宜乌拉尔甘草下胚轴、胚根和子叶愈伤组织诱导的激素组合分别为 2，4一D0．jmg／L+6BAl．0～2．0mg／L，2，4一DO．5mg／L+6BA2．0mg／L蓟￡ 2，4一D1．Omg／L+6队2．0mg几，KT不适合乌拉尔甘草愈伤组织诱导。对四种不同 类型的初代愈伤组织进行状态调控，连续继代培养不能改变原有状态，改变激 素种类比改变激素浓度更有效。 5．乌拉尔甘草形态建成有两种方式，直接器官形成，以Ms+TDz0．1mg／L +N从0．1mg／L，间接器官形成以下胚轴为外植体时，分化率52％，子叶愈伤组 未见分化。 6．建立了繁殖倍数较高的乌拉尔甘草快繁体系：以培养7天的无菌苗子叶 导形成的丛生芽数量相对最多，且生长整齐；将带一叶节段接种到增殖培养基 为1／2Ms+1．O～2．0 mg几核黄素，生根率86％：根系1～2cm长时直接移栽 到灭菌蛭石中，喷施l：800多萄灵杀菌，成活率达96％。筛选出F5A和F6A 两个优质株系，繁殖系数和总黄酮含量分别为28、1．3031％和27、1．2872％。 移栽后两个株系的地上部和地下部的总黄酮含量分别为2．0623％、4．5992％和 O．1164％、O．504l％。 7．子叶坚硬团块状初代愈伤组织中总黄酮含量最高，胚根愈伤组织中总黄 酮含量最低。松散状子叶愈伤组织在含有2mg／L的IAA和O．5mg／L的6BA的培 养基中总黄酮的含量和产量最高(0．0803％和41．876mg)，所有的愈伤组织中均 没有检测到甘草酸的合成；试管苗中总黄酮含量在培养30天时较高，之后含爨 下降，到70天后含量又逐渐升高，vB：最有利于黄酮的积累，O．5mg几时试管苗 中总黄酮含量为1．3136％。 本实验取材代表性强，AFLP标记稳定性和重复性强，结果可靠，所揭示的 乌拉尔甘草遗传多样性可以为资源保护、鉴定和评价以及人工驯化和育种工作 的开展奠定基础；离体再生频率高，快繁系数和有效成分含量高，可以作为转 基因、种质资源保存、倍性育种、品种推广等的技术平台。 关键词：乌拉尔甘草；遗传多样性；AFLP；愈伤组织；总黄酮；甘草酸；状态 调控；器官分化 studiesonGenetic AFLP andCultun跏M加ofLicorice Diversi时by (鲫删E砸“，n加曲Fisch。) GeneticsaIl