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例析现代生物技术中的筛选问题 　　筛选是现代生物技术中培育生物新类型过程中常用的手段。研究、解析有关筛选问题的试题，可以培养同学们思维的严谨性和创造性。现将现代生物技术中的筛选问题加以分类汇总，以供参考。 　　一、基因工程中的筛选 　　为了筛选出导人了目的基因的受体细胞，一般是在培养基中加入可检测标记基因是否表达的物质，再根据受体细胞表现出的性状加以选择，有时还要考虑目的基因的导人对标记基因的影响。常用的标记基因有抗生素抗性基因、荧光蛋白基因等。 　　例1 目前基因工程所用的质粒载体主要是以天然细菌质粒的各种元件为基础重新组建的人工质粒，pBR322质粒是较早构建的质粒载体，其主要结构如图一所示： 　　（1）构建人工质粒时要有抗性基因，以便于_______________。 　　（2）pBR322分子中有单个的BarnH Ⅰ限制酶作用位点，现将经BarnH Ⅰ处理后的质粒与用另一种限制酶BglⅡ处理得到的目的基因，通过DNA连接酶作用恢复_______________键，成功地获得了重组质粒。说明_______________。 　　（3）为了检测上述重组质粒是否导入原本无ampR和tetR的大肠杆菌，将大肠杆菌在含氨苄青霉素的培养基上培养，得到如图二的菌落。将灭菌绒布按到培养基上。使绒布面沾上茵落，然后再将该绒布按到含四环素的培养基上，经过培养，得到如图三的结果（空圈表示与图二对照无菌落的位置）。与图三空圈相对应的图二中的茵落表现型是_______________，图三结果显示，多数大肠杆菌导入的是_______________。 　　解析 （1）质粒上的抗性基因可作标记基因，便于鉴定受体细胞中是否导人目的基因。 　　（2）DNA连接酶能连接磷酸二酯键。经BamH Ⅰ处理后的质粒与用另一种限制酶BglⅡ处理得到的目的基因能连接起来，说明这两种酶切割获得的黏性末端相同。 　　（3）进行导入操作时，普通质粒和重组质粒都可能导入受体细胞，而目的基因自连的环状物无法导入。在导入操作后存在三种受体细胞的混合物：多数没有导人任何质粒的受体细胞（普通受体细胞）、很少导入pBR322质粒的受体细胞（不含目的基因）和导人重组质粒的受体细胞（获得目的基因）。图二中的菌落能抗氨苄青霉素，将灭菌绒布按到图二中培养基上，使绒布面沾上菌落，然后将绒布按到图三含四环素的培养基上培养，仍能生长的也能抗四环素，空圈为不能抗四环素的（只能抗氨苄青霉素）。图三结果显示，多数大肠杆菌既能抗氨苄青霉素，又能抗四环素，说明导入的是pBR322质粒，而不是重组质粒（重组质粒的四环素抗性基因被切断，不能表达，因此含重组质粒的大肠杆菌只抗氨苄青霉素）。 　　答案 （1）筛选（鉴别目的基因是否导入受体细胞） （2）磷酸二酯两种限制酶（BamH Ⅰ和BgtⅡ）切割得到的黏性末端相同 （3）能抗氨苄青霉素，但不能抗四环素pBR322质粒 　　二、植物细胞工程中的筛选 　　对杂种植物细胞的筛选，常用方法分析如下：①细胞系互补选择法：包括叶绿体缺失互补、营养缺陷互补和抗性互补等；②物理特异性差异选择法：利用两个原生质体的物理特异性差异的选择，包括原生质体的大小、颜色、浮密度等的不同进行选择；③生长特异性差别选择法：根据两种原生质体亲本的生长特异性来选择。 　　例2 　　右图为细胞融合的简略过程（只考虑两个细胞的融合），若A、B是基因型分别为rrHH、RRhh两个烟草品种产生的花粉，且这两对基因位于非同源染色体上，由于一对隐性纯合基因（rr或hh）的作用，在光照度大于800 lx时，都不能生长。 　　（1）实验开始时必须用_______________除去不利于原生质体融合的物质。 　　（2）实验中除获得杂种细胞外，还有基因型为_______________的融合细胞。 　　（3）设计一方法（不考虑机械方法），从培养液中分离出杂种细胞，方法：_______________。 　　解析 （1）利用酶的专一性，既能有效去除细胞壁，又不损害原生质体； 　　（2）融合细胞可以是同种的两个细胞融合（基因型为rrHH或RRhh），也可是不同种的两个细胞融合（基因型为RrHh）； 　　（3）基因型为rrHH或RRhh融合细胞不能在大于800 lx光照下生长，杂种细胞（RrHh）能在大于800 lx光照下培养，能增殖分化。 　　答案 （1）纤维素酶和果胶酶 （2）rrHH、RRhh （3）置大于800 lx光照下培养，收集分化的细胞团 　　三、单克隆抗体制备中的筛选 　　在单克隆抗体制备过程中有两次筛选：第一次筛选是B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合后，形成B淋巴细胞一B淋巴细胞、骨髓瘤细胞一B淋巴细胞、骨髓瘤细胞一骨髓瘤细胞以及未融合的亲本细胞等多种细胞成分，