实验四动物血液基因组DNA的提取要点.pptVIP

动物基因组DNA的提取 常祖明 2013级生物技术专业 分子生物学实验报告 姓名： 学号： 实验项目：实验四 动物血液基因组DNA的提取 1.实验目的 2.实验原理 3.实验试剂 4.实验步骤 5.实验注意事项 6.思考题 * * 背景知识 动物细胞中有哪些细胞器中含有DNA？ 与植物细胞的差别？ 背景知识 DNA的存在形式 背景知识 DNA的存在形式 背景知识 DNA的存在形式 背景知识 DNA的存在形式 核苷酸 双螺旋结构 一级结构-核小体 二级机构-螺线管 三级结构-超螺旋管 四级机构-染色体 +组蛋白 DNA为白色类似石棉样的纤维状物，大都呈酸味。 DNA是极性化合物，一般都溶于水，不溶于乙醇、氯仿等有机溶剂，它们的钠盐比游离酸易溶于水。 在酸性溶液中，易水解，中性或弱碱性溶液中较稳定。 DNA的理化性质 实验目的 掌握CTAB法提取植物DNA的原理 掌握CTAB法提取植物DNA的实验方法 注意：此方法会把少量RNA提取出来，故后面通称核酸的提取。 实验原理 哺乳动物的成熟红细胞已经高度分化，因而当中没有细胞核，无法提取DNA。禽类的血细胞则可以。禽类代谢旺盛，血液中红细胞更多，而且红细胞中有完整的细胞核、大量的染色体。且材料易得、经济。 用鸡血细胞做实验材料有两个原因： 一是因为鸡血细胞核的DNA含量丰富，材料易得； 二是鸡血细胞极易吸水胀破，而用动物肝脏细胞作实验材料常常需要匀浆和离心，对设备要求较高，操作繁琐，历时较长。 实验原理 固定 血样采集 抗凝血 裂解细胞 蛋白质降解 蛋白质变性 沉淀DNA 洗涤去杂质 普通家鸡 无水乙醇、柠檬酸、柠檬酸钠、尿素、十二烷基硫酸钠(SDS)、1M Tris-HCl(PH8.0)缓冲液、乙二胺四乙酸二钠(EDTA-2Na) 、蛋白酶K、Tris饱和酚、氯仿(三氯甲烷)、异戊醇 实验材料 实 验 仪 器 取血针及管 离心机：3台/12管 离心管： 水浴锅：65℃ 移液枪（包括枪头） 实验试剂 1. 75%的乙醇 2.ACD抗凝剂 100ml（共需48ml，每管0.8ml） 3.禽血裂解液 100ml（共需51ml，每管1.7ml） 4.氯仿-异戊醇（24:1）共需54ml，每管1.8ml 5.酚-氯仿-异戊醇（25:24:1） 共需60ml，每管2ml 6. TE缓冲液 PH8.0 50ml 实验步骤 75% 乙醇 20ml 翅下取血5ml 5ml 离 心 管 800ul ACD抗凝剂 800ul ACD抗凝剂 8000转 离心1分钟 弃上清液 8000转 离心1分钟 弃上清液 取680ul 8000转 离心1分钟 55℃水浴 过夜 1700ul 裂解液 10ul 蛋白酶K 实验步骤 2ml饱和酚 摇匀至 无块状 12000转 离心10分钟 DNA 酚 蛋 白 层 5ml 离 心 管 取上层透明 的DNA溶液 2ml酚-氯仿-异戊醇 12000转 离心10分钟 5ml 离 心 管 取上层 DNA液 1.8ml氯仿-异戊醇 12000转 离心10分钟 5ml 离 心 管 取上层 DNA液 无水乙醇 75%无水乙醇 1000ulTE缓冲液 晾干 -20℃保存 在整个实验过程中应严格执行无菌操作； 部分药品有毒，操作中应注意安全防护； 刚投入水浴时可以稍快速的晃动，之后的晃动一定要轻柔！ ? 再每一次加入药剂后，都要轻轻晃动离心管，使之混匀。? 注意事项 思考题 本实验中用到的各种试剂的作用是什么？ 本实验中进行了几次离心操作，每次的目的？ 实验安排 按照学号分组进行实验，每6人一组，一组做3管，用一个研钵。每3组共用1台离心机同时进行离心操作。 6人一组 实验报告 *