大麦Amy32b的遗传多样性及其对alpha;-淀粉酶活性的影响.pdfVIP

中国农业科学 2012,45(5):823-831 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2012.05.001 大麦Amy32b 的遗传多样性及其对α-淀粉酶活性的影响 1,2 1 1 姜晓东 ，张 京 ，郭刚刚 1 2 （中国农业科学院作物科学研究所，北京 100081； 山西农业大学农学院，山西太谷 030801 ） 摘要： 【目的】通过对Amy32b 遗传多样性研究，发掘与α-淀粉酶活性相关的等位变异。【方法】设计能够 覆盖 Amy32b 序列的特异引物，研究该基因在中国大麦的等位变异类型：单核苷酸多态性位点（SNP）及插入 （insert）、缺失（delete）等。利用RT-PCR 获得Amy32b 的全长cDNA 序列，分别将携带等位变异的全长cDNA 和截短cDNA 连入表达载体pET-28a (+)，并对表达产物进行纯化、活力测定及比较研究。 【结果】根据对已公布 的Amy32b （x05166）的扩增，发现在基因编码区有一多态性位点G/A （cSNP）和 1 个A 碱基的插入/缺失突变。 分别位于Amy32b 的碱基序列2 269 bp 和2 403 bp，其中，G/A 转换导致第355 位氨基酸由谷氨酸（E）替换为 赖氨酸 （K）；A 碱基插入导致终止密码的形成，引发了碱基片段缺失以及编码氨基酸序列和α-淀粉酶蛋白C 端 的提前终止。克隆出Amy32b 全长和截短cDNA，长度分别为1 314 bp 和1 266 bp。酶活性测定结果表明，两种 全长重组酶（rAmy32b_A 和rAmy32b_G）均具有正常且相同的淀粉酶活性，而截短的突变酶（r ΔAmy32b）未能 测出淀粉酶活性。【结论】Amy32b 的碱基插入/缺失突变形成终止子，引发碱基片段缺失和编码α-淀粉酶C 端 截短，造成酶活性的丧失；而G/A 转换造成的氨基酸替换则对该酶活性没有影响。 关键词：大麦；Amy32b；编码区单核苷酸多态性；α-淀粉酶活性 Polymorphism of the Amy32b Gene and Its Effect on the α-Amylase Activity in Barley 1, 2 1 1 JIANG Xiao-dong , ZHANG Jing , GUO Gang-gang 1 2 ( Institute of Crop Sciences, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Beijing 100081 ; Agronomy College, Shanxi Agricultural University, Taigu 030801, Shanxi) Abstract: 【Objective 】 The objective of the experiment is to study the polymorphism of the Amy32b gene in Chinese barley and dissect its relevance to the α-amylase acti