甘蓝型油菜抗菌核病近等基因系和感病亲本蛋白差异的初步研究.pdfVIP

中国农业科学 2010,43(10):2000-2007 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2010.10.004 甘蓝型油菜抗菌核病近等基因系和感病亲本蛋白 差异的初步研究 皇甫海燕，官春云 （湖南农业大学农学院/ 国家油料改良中心湖南分中心，长沙 410128 ） 摘要：【目的】建立适合于提取油菜叶片全蛋白的三氯乙酸/丙酮沉淀法，为今后油菜蛋白质组学的研究提供 参考，明确菌核菌诱导抗、感菌核病油菜后的蛋白差异表达情况，为寻找抗菌核病基因提供线索。【方法】以油 菜抗菌核病近等基因系 98C40（抗原来自湘油 15）和感菌核病亲本 98C40 为材料，在其生长的苗期阶段，接种菌 核菌 72 h 之后，分别提取其叶片全蛋白。运用双向电泳技术、PD-quest 软件、质谱技术对其进行差异蛋白质组 分析。【结果】检测到抗病98C40（抗原来自湘油15）与感病亲本98C40 之间有4个差异蛋白点，蛋白点a，线粒 体 ATP 合酶 F1β 亚基（mitochondrial F1 ATP synthase beta subunit）；蛋白点 c，磷酸甘油酸激酶 （phosphoglycerate kinas）；蛋白点d，噻唑生物合成酶（THI1）；这3个蛋白只在抗病98C40（抗原来自湘油 15 ） 上 表 达 ， 而 在 感 病 亲 本 98C40 上 不 表 达 。 蛋 白 点 b ， 1,5- 二 磷 酸 核 酮 糖 羧 化 酶 / 加 氧 酶 （ribulose-1,5-bisphosphate carboxylase/oxygenase）；按5倍差异表达量计算，在抗病98C40（抗原来自湘 油 15）上高表达，而在感病亲本 98C40 上低表达。【结论】这 4 个蛋白都是油菜代谢相关蛋白，它们可能在油菜 抗菌核病的反应中发挥作用。 关键词：油菜；菌核病；蛋白质组学；近等基因系；双向电泳；质谱鉴定 A Preliminary Analysis of Differential Proteins Between Brassica napus Resistance to Sclerotinia sclerotiorum Near-isogenic Lines and Susceptible Parent HUANGFU Hai-yan, GUAN Chun-yun (Department of Agronomy,Hunan Agricultural University/the Branch Center of Hunan, The National Improvement Center of Oilcrop, Changsha 410128) Abstract: 【Objective 】 A trichoroacetic acid/acetone method was established for extracting the full leaf-proteins of rapeseed which provided the reference for the rapeseed proteomics research in the future. The difference in protein expression was identified after the resistance and susceptibility to Sclerotinia sclerotiorum rapeseed were induced by Sclerotinia sclerotiorum. It