利用PRNP-_-羊制备朊蛋白多克隆抗体及其特性分析.pdfVIP

利用PRNP-_-羊制备朊蛋白多克隆抗体及其特性分析.pdf

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中国农业科学 2012,45(7): 1399-1405 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2012.07.019 -/- 利用PRNP 羊制备朊蛋白多克隆抗体及其特性分析 1 1 3 2 1 2 王学斌 ,俞慧清 ,吴晓东 ,徐旭俊 ,陈建泉 ,成国祥 1 2 3 (上海转基因研究中心,上海 201210 ; 上海杰隆生物工程股份有限公司,上海 201210; 中国动物卫生与流行病学中心, 青岛 266032,山东) -/- 摘要:【目的】利用朊蛋白双基因敲除(PRNP )羊制备朊蛋白多克隆抗体,并对其特性进行分析。【方法】 -/- 构建山羊朊蛋白(PrP)原核表达载体,转入大肠杆菌并诱导表达,纯化获得羊PrP;将获得的PrP 免疫PRNP 山 羊,制备朊蛋白特异性的多克隆抗体;并对获得的朊蛋白多克隆抗体进行ELISA 及Western-blot 检测。【结果】 获得了大量的朊蛋白特异性抗血清,间接ELASA 检测抗血清中朊蛋白多克隆抗体的效价为 25600;Western-blot 检测显示所制备抗体不仅可以识别鼠、牛、羊脑组织内源性朊蛋白,而且能识别鼠脑组织内朊病毒。【结论】PRNP-/- 转基因山羊可用于制备大量高亲和力朊蛋白多克隆抗体,获得的抗体可用于多种动物朊蛋白及朊病毒类疾病的检 测。 关键词:朊蛋白;朊病毒;多克隆抗体; 朊蛋白双基因敲除山羊 Production and Characterization of Anti-PrP Polyclonal Antibody by PRNP Gene Knockout Goat 1 1 3 2 1 2 WANG Xue-bin , YU Hui-qing , WU Xiao-dong , XU Xu-jun , CHEN Jian-quan , CHENG Guo-xiang 1 2 ( Shanghai Transgenic Research Center,Shanghai 201210; Shanghai Genon Bioengineering Limited Company, Shanghai 201210 ; 3China Animal Health and Epidemiology Center, Qingdao 266032, Shandong) Abstract: 【Objective 】The study was conducted in order to produce and characterize anti-PrP polyclonal antibodies by prion protein knockout

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