利用PTN系统快速解析转基因水稻种子可溶性蛋白非预期变异的来源.pdfVIP

中国农业科学 2015,48(22):4397-4407 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2015.22.001 利用PTN系统快速解析转基因水稻种子可溶性蛋白 非预期变异的来源 赵 艳，李燕燕 （浙江工商大学食品与生物工程学院，杭州 310018 ） 摘要：【目的】建立转基因（genetically modified，GM)水稻安全性评价的亲本对照-转基因株系-非转基因 对照（parent control-transgenic plant-nontransgenic control，PTN)系统。通过实质等同性比对分析，追溯 GM 水稻种子蛋白质非预期变异的技术根源，为 GM 水稻的安全性评价提供技术支持。【方法】根据 GM 水稻植株培 育的技术原理，收集转基因株系（transgenic line，T）、亲本品种（parent variety，P）及其他遗传学背景相 关的非转基因组培再生株系（non-transgenic regeneration line from tissue culture，NR）和非转基因遗传 分离阴性后代株系（non-transgenic segregated negative offspring line，NS）等对照样本。以转 2mG2-epsps 抗草甘膦GM水稻株系T13和T23及各自的PTN系统对照样本（P、NR 和NS）为试验材料，以种子蛋白质含量和组 分的非预期变异为研究对象，根据PTN样本间的多重比较结果解析并追溯GM水稻非预期变异的技术根源。水稻种 子可溶性蛋白的提取采用分级提取法，依次用蒸馏水、5% NaCl、70%乙醇和 0.1 mol·L-1 NaOH 提取稻米清蛋白、 球蛋白、醇溶蛋白和谷蛋白。蛋白含量测定应用 Bradford 法，蛋白组分分析采用 SDS电泳法。【结果】GM 水稻株系 T13 和 T23 种子总可溶性蛋白含量分别比亲本显著降低 3.29%和 6.84%，主要受谷蛋白变异影响，但 GM 水稻变异的最大幅度小于天然水稻亲本 P1 和 P2 品种间差异，说明 GM 水稻种子可溶性蛋白含量变异在安全 范围之内。与各自亲本相比，GM 水稻株系种子清蛋白和醇溶蛋白组分差异不显著，球蛋白和谷蛋白个别组分存 在显著或极显著变异，主要表现为含量的增减。T13 株系的 56 kD 和 24 kD 球蛋白含量比亲本 P1 显著增加，T23 的 65 kD 球蛋白含量比亲本 P2 极显著降低。GM 株系 T13 和 T23 的谷蛋白组分变异趋势相似，与相应亲本相比， 主要表现为 19—23 kD 和 33—38 kD 谷蛋白含量显著增加，100 kD 和 9 kD 谷蛋白含量显著减少。突出的变异 是 GM 水稻新增加了 41 kD 和 56 kD 谷蛋白组分，但这些变异新组分也同样存在于 NR 和 NS 对照样本中。GM 水 稻株系 T13 和 T23 的可溶性蛋白非预期变异的特征与相应的 NR 对照样本基本一致。NS23 对照株系的清蛋白含 量和球蛋白组分存在不同于 T23 和 NR23 的独特非预期变异。【结论】GM 水稻种子总可溶性蛋白质变异主要受谷 蛋白含量变异影响，变异幅度小于天然水稻品种间差异。GM 水稻种子的清蛋白、醇溶蛋白组分未发生显著变异， 球蛋白和谷蛋白个别组分发生了显著变异。GM 水稻种子蛋白质非预期变异主要来源于组织培养无性系变异，转 基因插入突变的影响较小。 关键词：转基因水稻；种子可溶性蛋白；PTN系统；非预期变异；技术来源 Rapid Identify the Sources of Unintended Variations of Seed Soluble Proteins in Genetically Modified Rice by Using PTN System