sirna文库选恒河猴脑星形胶质细胞内与hsv--1增殖相关的磷酸酶基因及pnkp作用机制的初步研究.pdfVIP

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2016-03-04 发布于贵州
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sirna文库选恒河猴脑星形胶质细胞内与hsv--1增殖相关的磷酸酶基因及pnkp作用机制的初步研究.pdf

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sirna文库选恒河猴脑星形胶质细胞内与hsv--1增殖相关的磷酸酶基因及pnkp作用机制的初步研究

目录中文摘要……………………………………………………………………………………………一I Abstract…．………．…．．…………．…．…．…．．．………．．…………………………．…………………．………………．．．．………．III 前言…………………………………………………………………………………………………．1 第一部分磷酸酶siRNA文库筛选恒河猴脑星形胶质细胞内与HSV-1复制相关的基因……．．5 一、实验材料与方法…………………………………………………………………………．5 (一)实验材料…………………………………………………………………………．5 (二)实验方法…………………………………………………………………………．8 二、结果及分析………………………………………………………………………………16 (一) 原代恒河猴脑星形胶质细胞的分离培养………………………………………16 (二) 免疫荧光鉴定原代恒河猴脑星形胶质细胞……………………………………17 (--)星形胶质细胞感染HSV-1的形态观察………………………………………．．18 (四) 不同代次星形胶质细胞感染HSV-1后病毒增殖分析一空斑实验……………19 (五) 文库筛选恒河猴星型胶质细胞内与HSV-1增殖相关的关键基因……………20 (六) 利用生物信息学了解PNKP功能………………………………………………25 三、讨论………………………………………………………………………………………28 (一) 细胞的选择………………………………………………………………………28 (二) 文库筛选…………………………………………………………………………29 四、小结………………………………………………………………………………………33 第二部分PNKP影响HSV-I增殖功能的初步研究．……j……………………………………．34 一、实验材料与方法…………………………………………………………………………34 (一)实验材料…………………………………………………………………………34 (二)实验方法…………………………………………………………………………38 (一)PNKP干扰片段的确定…………………………………………………………49 (二)PNKP影响HSV-1在恒河猴星状胶质细胞中的增殖情况…病毒增…………50 殖曲线……………………………………………………………………………………50 (三) 初步考察PNKP对HSV-1各期基因转录水平的影响……a、p、丫…………50 (四)PNKP对HSV-I基因组复制的影响……………………………………………52 (五)PNKP对HSVol基因组环化的影响……………………………………………53 (六)PNKP表达载体的构建…………………………………………………………54 (七)PNKP在星形胶质细胞中的表达………………………………………………58 (八) 上调PNKP在星形胶质细胞的表达对HSV-1增殖的影响…………………一58 三、讨论………………………………………………………………………………………60 (一) 筛选结果…………………………………………………………………………60 (二)PNKP与DNA损伤修复………………………………………………………．61 (三)PNKP与HSV-1的复制机制……………………………………………………63 I四、，J、结…………………………………………………………………………………………………………………．．68 全文总结和展望……………………………………………………………………………………69 参考文献……………………………………………………………………………………………70 论文综述……………………………………………………………………………………………76 附录…………………………………………………………………………………………………………………………………8l 附录一：缩略语………………………………………………………………………………81