erbin与pk1激酶相互作用的研究.pdfVIP

THE INTERACTION BETWEEN ERBIN AND PLK1 KINASE A Dissertation Submitted to the Graduate School of Henan University in Partial Fulfillment of the Requirements for the Degree of Master of Medicine By Diao Dekun Supervisor: Ma Yuanfang Guo Ning May, 2013 摘 要 研究背景：有丝分裂是细胞生命活动的重要特征之一，从十九世纪末发现至今一直 受到科学家的高度重视和关注，经过漫长的探索和研究，科学家们发现细胞有丝分裂是 受时间和空间上的复杂、精巧的调控过程。细胞有丝分裂异常会导致非整倍体 （aueuploidy ）细胞的增加，与肿瘤的发生和发展具有密切的联系。 经漫长的进化过程，细胞具备了能保证细胞周期DNA 复制和染色体分配顺利完成 的检查机制，被称为细胞周期检查点 （cell cycle checkpoints ）。细胞周期检查点的调控 机制是保证细胞周期事件按次序、正常发生的细胞周期调控机制，也是细胞周期调控的 关键因素。细胞周期检查点的调控主要通过一系列酶来完成的，根据文献报道，参与细 胞有丝分裂重要的调控酶类主要有：Plk1 ，Cdk1 等细胞周期依赖性蛋白激酶 （cyclin-dependent kinases，CDKs ），PP1 ，Cdc14 等细胞周期的磷酸酶，纺锤体组装检 查点（spindle assembly checkpoint，SAC ）和E3 泛素连接酶后期促进复合体等相关分子。 Plk1 （Polo-like kinase 1）是细胞周期有丝分裂重要的丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶，在 细胞有丝分裂进程中发挥极其重要的作用，在细胞周期不同亚期 Plk1 定位不同。到目 前为止，已经揭示有几十个 Plk1 的底物，Plk1 通过与这些底物相互作用来影响细胞周 期有丝分裂的进入、纺锤体的形成、姐妹染色单体间的分离、中心体的复制以及胞质分 裂的过程；另外，Plk1 本身的亚细胞定位也受相应底物的调控。在人类肿瘤的发生发展 过程中，最主要的表现为细胞增殖异常和迁移能力的增加，激酶 Plk1 是调控细胞有丝 分裂的关键分子，经大量的研究证实在肿瘤细胞中 Plk1 具有明显的高表达；在体外细 胞培养和动物实验中，低表达Plk1 能够有效地抑制肿瘤细胞的增殖并促进其自身凋亡， 但对正常细胞没有明显的影响。因此，在人类肿瘤的治疗中，Plk1 激酶的靶向治疗很可 能成为的潜在新方法。 Erbin （ErbB2 Interacting protein ）定位于细胞膜和相邻细胞连接处，最早在2000 年 以癌基因ErbB2 为诱饵通过酵母双杂交实验时被发现，并因此而命名。我们实验室早期 自主制备了Erbin 抗体，在检测Erbin 抗体做免疫荧光时发现，Erbin 具有细胞周期依赖 性表达升高和有丝分裂亚细胞动态定位的特征，这些研究结果提示Erbin 在细胞周期中 对细胞有丝分裂可能具有重要的调控作用。我们也发现Erbin 具有有丝分裂依赖的磷酸 化修饰特征，其磷酸化发生与Plk1 的激活时程（time pattern ）相似，且在细胞周期有丝 I 分裂中存在明显的亚细胞共定位（中心体