中国h3n2亚流感病毒血凝素基因分子变异研究.pdf

中文摘要 中国H3N2亚型流感病毒血凝素基因分子变异研究 博士研究生： 董丽波 导 师： 梁国栋 研究员 舒跃龙 研究员 中文摘要 流感是由流感病毒引起的呼吸道传染病，流感病毒包括A、B、c3种型别。流感 病毒根据其血凝素和神经氨酸酶的不同分为16个H亚型，9个N亚型。甲型流感病毒常 引起大范围流感流行，其中H3N2亚型白1968年引起流感大流行以来一直是人群中流 行的一个主要亚型。流感病毒以其表面抗原频繁变异，每年引起新的流行。H3N2亚型 流感病毒的血凝素基因(HA)编码的血凝素是产生中和抗体的重要抗原，并在病毒的 受体识别和复制中起重要作用。研究表明中和抗体所针对的抗原位点和受体结合位点 行有密切关系，在流感的抗原性研究和疫苗选择中有重要意义。研究其分子变异在流感 的预防控制工作中十分重要。本研究对我国保存的H3N2亚型流感毒株进行系统的序列 测定和分析。以阐明我国H3N2亚型流感HAl基因变异特征，比较中国流行毒株与 WHO每年推荐疫苗株的相关性。 首先整理国家流感中心历年来保留的毒种和相应的毒株背景信息记录，建立毒株数 据库。为了全面代表中国流行毒株特征，按以下原则选取毒株，每年按照毒株分离的省 区不同，选取不同分离月份的毒株进行测序。有些年代毒株数量少于lO个，全部测序。 毒株依据原传代史用鸡胚或细胞复苏。提取核酸后用RT—PcR方法扩增HAl基因片 行序列的差异分析，使用MEGAversion3．1软件绘制基因种系发生树，并进行核苷酸 和氨基酸的变异速率和距离分析。将我国每年的H3N2序列代表株与WHO推荐的疫 苗株进行序列比较分析。 中国H3N2亚型漉感病毒血凝素基团分子变异研究 分析结果如下： 1．从中国历年病毒与1968年病毒的距离可以看出，H3N2亚型流感病毒在中国各 地区的进化是按时间先后进行的。H3N2流行的高峰期全国各地区的序列一致性较强。 在H3N2流行的间期病毒序列间差异较大。 2．H3N2亚型流感病毒HAl区核苷酸和氨基酸的进化树均呈典型的阶梯形，以单 一主干向上发展，树的侧枝很短，主干很长，显示出新旧毒株的更替很快。HAl的核 苷酸进化树与氨基酸进化树相比有更多的分支，氨基酸树比核苷酸树分支分组更为明 显。 比南方分离病毒更远，推测这三次H3N2流行是从中国南方传到北方。而1995～1996 年和2000～2004年没有明显的南北方距离差异 速率为6．1×10。replacements／yeara 5．高变的位点和稳定变化的位点多是已知的抗原位点及其附近的位点。受体结合 年没有改变，其改变与流行相关。H3N2亚型流感病毒HAl的氨基酸位点每年变异的 幅度不同，有的年位点多，有的年少。 6．通过HAl序列资料分析发现导致H3N2流行的三种方式，第一种是同时出现 多位点变化，第二种是位点变化逐渐发生累积到多个位点变化，第三种是单个抗原位点 和受体结合位点同时改变。 苗株处于滞后状态。 现HAl序列是按时闻进化的，H3N2病毒在流行的前10年变异的速度较快。通过对变 异位点的分析，发现抗原位点的不断变化，受体结合位点的变异和潜在糖基化位点的改 变共同促进HA的进化，引起H3N2亚型流感的新流行。同时出现多位点变化，逐渐发 生累积到多个位点变化，单个抗原位点和受体结合位点同时改变三种变异方式均可引起 Ⅱ 主奎塑墨 多株疫苗株比中国的流行株要滞后。本文首次对我国的H3N2的历史毒株进行系统研究， 为H3N2的HAl基因的未来变异研究提供一定的依据。 关键词：H3N2流感病毒；血凝素；进化 Ⅲ 中国H3N2亚型流感病毒血凝素基因分子变异研究 Abstract acute causedinfluenzavires． Influenza,an infection，is