兔舌黏膜细胞构组织工程化角膜上皮的初步实验研究.pdf

上海交通大学硕士毕业生论文 英文缩略词表 简称 英文全称 中文全称 LSCs Limbal Stem Cells 角膜缘干细胞 LSCD Limbal Stem Cell Deficiency 角膜缘干细胞缺乏 症 PBS Phosphate Buffered Saline 磷酸盐缓冲液 DMEM Dulbecco’s modified Eagle’s Medium 改进的Eagle 培养 基 EC epithelial cell 上皮细胞 HE Hemotoxylin-Eosin 苏木精伊红 TEM Transmisson electron microscope 透射电子显微镜 FBS Fetal bovine serum 胎牛血清 Recombinant Human Epidermal Growth 重组人上皮生长因 RhEGF Factor 子 DispaseII Neutral protease ，grade II 中性蛋白酶II AM Amniotic membrane 羊膜 KSFM keratinocyte serum free medium 无血清角质细胞培 养液 4 上海交通大学硕士毕业生论文 兔舌黏膜细胞构建组织工程化角膜上皮的初步实验研究 摘要 目的：探讨体外培养兔舌黏膜上皮细胞的生物学特性。采用羊膜为载体培养兔舌黏膜上皮细胞。 探讨兔舌黏膜上皮细胞以羊膜为载体构建组织工程化角膜上皮的可行性。 方法：消化法培养兔舌黏膜上皮细胞，通过倒置相差显微镜、免疫细胞化学法分析兔舌黏膜上皮 细胞的生长特性。兔舌黏膜上皮细胞种植于去上皮羊膜上进行培养扩增，将培养获得的上皮细胞 进行HE 染色、免疫组织化学鉴定和透射电镜观察。 结果：体外培养的舌黏膜细胞呈上皮细胞的典型形态,角蛋白免疫组化染色阳性。经过 2-3 周培 养，兔舌黏膜上皮细胞可在去上皮羊膜上增殖形成复合上皮。HE 染色显示该复合上皮由2-3 层 细胞组成。免疫组织化学显示细胞角蛋白表达阳性。透射电镜观察显示细胞间可见桥粒连接，基 底层细胞与去上皮羊膜之间有半桥粒连接。 结论：初步研究显示兔舌黏膜上皮细胞以去上皮羊膜为载体构建的复层上皮细胞类似于兔角膜上 皮，构建复合上皮的方法有待进一步改进以期获得更接近正常角膜上皮的组织工程化角膜上皮。 关键词：兔舌黏膜上皮细胞；培养；去上皮羊膜；组织工程；角膜 2