兔角膜缘干细胞外无饲养层培养体系的建立.pdfVIP

山西医科大学硕士学位论文 兔角膜缘干细胞体外无饲养层培养体系的建立 摘要 Rabbit)角膜缘干细胞 目的在不添加饲养层细胞的条件下对新西兰兔(New-Zealand bovine 进行培养，观察胎牛血清(fetal 响，确定角膜缘干细胞培养适宜的血清浓度和种植密度，据此建立兔角膜缘干细胞体外无 饲养层培养体系，为构建组织工程化角膜及角膜基础研究积累实验资料。 II酶将新西兰兔角膜缘组织消化成单个细胞，再用含5％，10％ 方法(1)先用Dispase 和20％胎牛血清的培养液制成等密度的细胞悬液，不添加饲养层细胞，直接种植于底物， 观察原代培养时不同血清浓度下角膜缘干细胞的生长状况、检测48h贴壁率；MTT法检测 其增殖活性；原代培养第5d行p63和角蛋白K3免疫荧光染色分别检测角膜缘干细胞和分 细胞含量及其原始细胞特性的维持状况。 较小；高密度组细胞在传代第3d已接近融合，p63阳性率显著下降，角蛋白K3表达明显增 多，第5d p63阳性率进一步下降，高密度组第3d和第5dp63和角蛋白K3阳性率与第ld比较 差异均具有统计学意义(P0．001)。 结论(1)采用细胞悬液法在体外无饲养层条件下可以成功分离和培养出具有高增殖 能力的新西兰兔角膜缘干细胞；(2)在培养体系中加入10％胎牛血清，既可以保证原代培 养的新西兰兔角膜缘干细胞有较高的贴壁率，同时又能抑制其分化；(3)在进行传代培养 时，采用低密度种植更有利于角膜缘干细胞特性的维持。 关键词干细胞，角膜缘，细胞培养，饲养层细胞 山西医科大学硕士学位论文 of rabbitlimbal Establishmentculturewithoutfeedercellsof system stemcellsin vitro Abstract Toculture in New-ZealandRabbitlimbalstem feedercells objective cells(LSCs)without theeffectoffetalbovineserum onthe vitro，observe density biological fiBS)andseeding characteristicsof thesuitableconstructionofFBSand forLSCs LSCs，determine seedingdensity establishLSCsculture withoutfeedercellsbasedon culture，and system for informationreconstructionoftissue corneaandthebasicresearchof engineered study cornea．