nucleoposminb23在肝癌细胞生长抑制中的分子调控研究.pdf

的分子调控研究★ 专 业：肿瘤学 学位申请人：苏曙光 导 师：云径平副教授 摘 要 目的 蛋白，在细胞生长和增殖中发挥重要的作用。以往研究表明它与肿瘤发生发展有 关，但它参与肿瘤细胞生长抑制的分子调控机制尚未明了。本研究采用抗癌药物 抑制肿瘤细胞生长的实验模型，探讨B23在肝癌细胞生长抑制中的分子调控机 制． 材料和方法 用低浓度(O．05 mg／L)的放线菌素D处理HepG2细胞，，拟用流式细胞仪 (Flow Blot)、 electrophoresis) 等技术，检测HepG2细胞周期、B23蛋白表达水平及其定位、B23的等电点及磷 酸化状态变化；应用免疫荧光和免疫共沉淀探讨B23与P53在药物处理前后之问 N—h_hI一-f磁3在肝癌组囊生长抻■中帕分子弭控研究 的相互关系。 结果 细胞生长曲线显示放线菌素D引起肝癌细胞株不可逆性生长抑制，流式细胞 仪检测结果显示：细胞周期阻滞在S／G2期；免疫荧光及免疫印迹结果显示：B23 在放线菌素D作用下蛋白表达量没有变化但发生可逆的定位改变；双向电泳及磷 酸化状态检测显示：B23在加药和撤药处理后，没有等电点和磷酸化状态改变； 免疫印迹结果显示：放线菌素D抑制肝癌细胞生长的状态下，p53及p21表达量 显著增加，免疫沉淀结果显示药物作用后B23与P53有相互结合． 结论 可逆性核仁核浆的定位变化并促使B23蛋白与p53蛋白相互作用，而B23蛋白 的表达量、等电点和磷酸化状态没有改变，实验表明B23可能通过与p53相互作 用在肿瘤细胞生长抑制中发挥重要作用，低浓度放线菌素D抑制肿瘤细胞生长的 实验可作为B23与其他分子相互作用的研究模型。 关键词：Nucleophosmin(NPM)／B23；P53；细胞周期；磷酸化 ★本研究为国家自然科学基金资助课题(基会号 Ⅱ onmolecular of in Study regulation cancercell inhibitionofHver growth Major Oncology Name Su ShuGuang Associate Yun Supervisor Prof．JingPing ABSTRACT Objective a multifunctional B23(Nucleophosmin,NPM，numatrirkN038)is locatedinnucleofiand an roleincell phosphorylatedprotein playsimportant growth and were stillSOFI譬debatesabout mechanism proliferation．However,there regulatory atmolecularlevel．Our researchwil