依赖输血的β地患儿pra干扰脐血cd34lt;#39;+gt;细胞增殖分化的研究.pdf

拯夔捻鱼曲＆丝蕴璺』L￡丛王选避鱼￡Q塑：细盥缝堕筮丝鲤盟荭 摘要 细胞增殖分化的研究 硕士研究生：杨兴鸽 导 师：方建培教授 中山大学附属第二医院儿科 中文摘要 9—地中海贫血(简称B地贫)是全球范围内影响人类健康和寿命的最常见遗 传性血液病之一。据世界地贫协会(ThalassemiaInternationalFederation，TIF)估计， 约1．5％的世界人口携带本病基因(即约8000-一9000万人)。在目前进行遗传咨询和 产前诊断尚未广泛开展的情况下，重型B地贫的治疗仍是一个棘手的现实问题。 二十多年的临床实践证实，造血于细胞移植(HSCT)是目前根治本病的唯一有效方 法，它包括骨髓造血干细胞移植(BMT)、外周造血干细胞移植(PBSCT)、脐血 造血干细胞移植(UCBT)。 由于观念上的误解和骨髓采集时的痛苦，加之我国骨髓库近几年才开始建立。 距临床规模应用尚有时日，在我国相当一段时间内非血缘相关供者骨髓和外周血 的HSC来源将受到极大的限制。相对而言，脐血(UCB)较骨髓和外周血富含更 原始的造血干／祖细胞，其增殖、分化及形成集落的能力，受到刺激进入细胞周期 的速度及对各种造血刺激因子的反应能力，均高于骨髓和外周血细胞，且脐血中 的免疫细胞发育相对不成熟，脐血移植GVHD的发生率与严重程度都较骨髓及外 周血干细胞移植要低；加之来源广泛，采集方便，冻存和复苏技术都较为成熟， 脐血己成为干细胞的重要来源之一。 cordblood 十多年的脐血移植(umbilical UCBT治疗地贫患者的植入率低于UCBT治疗自血病的植入率。在临床肾移植中 reactive 移植前输血可以诱导群体反应性抗体(paneI antibody,PRA)的产生，而且 输血的次数与致敏程度及抗体持续的时问成正比，由此是造成超急性排斥反应和 筮夔绚鱼曲E丝蕴星毡￡壁△王迭监堕￡Q塑：绁照增堕盆他的鲤红 擅噩 移植肾丢失的主要原因：这也可能足引起B地贫患者HSCT低植入率的原因。本 研究拟在体外将脐血CD34+细胞与实验血清孵育(地贫患者PRA阳性血清、地贫 患者PRA阴性的对照血清)，通过测定乳酸脱氢酶水平、流式细胞仪检测CD34+ 细胞凋亡及坏步E情况；通过体外脐血CD34+细胞半固体集落培养及3H掺入法测定 细胞的增殖能力，探讨PRA对脐血CD34+细胞增殖分化的影响，为分析地贫患者 UCBT低植入率的可能机制提供实验依据。 材料和方法 1．标本来源 脐血(CB)：本院健康足月妊娠分娩之胎儿脐静脉血，用含枸橼酸钠的一次性 采血袋收集，采血量为80～100ml，共七份。 实验血清：在我科确诊为B地中海贫血且依赖输血(输血次数／3)的患儿， 每人抽取全血5ml至无菌干燥管中，离心后分离血清，一20℃冰箱保存待检测。 共收集七份PRA阳性血清和七份PRA阴性血清。 2．实验方法 2．1 PRA检测： 收集血清标本后，采用美国One Lambda公司提供的莱姆德混合抗原板 用不同的HLA抗原包被泰萨奇(Terasaki)板，以特异性检测抗HLA lgG抗体。 PRA10％为阳性。 2．2脐血的HLA 从采集到的脐血标本中取出2ml送HLA抗原分型检测，仅检测HLA．I类抗原 中的A位点和B位点，采用一步法单克隆抗体技术。具体步骤参考文献。由专人 检测并报结果。 2．3单个核细胞的分离 采用Ficoll—Hapaque分离法。 2．4 CD34+细胞的分选 采用免疫磁珠分选法，分选后以流式细胞仪检测所得细胞的纯度。 2．5脐血CD34+细胞与实验血清、孙体共孵育分组 篮塑殓查艘E地蕴墨』k艘丛王选堕鱼￡立3垒：细照埴堕盆丝的班究