趋化因子cxc11i-tac和ccl22mdc在病理性瘢痕中的表达.pdfVIP

·中文结构式摘要· 趋化因子CXCLl1／I-TAC和CCL22／MDC 在病理性瘢痕中的表达 实验目的 瘢痕是各种皮肤损伤诱发的连锁性体液一细胞反应，导致以纤维蛋白为主的修 复过程的产物。根据其组织学和形态学区别，可分为四类：表浅性瘢痕、萎缩瘢 痕性、增生性瘢痕，瘢痕疙瘩。其中增生性瘢痕(hypertrophicscar，HTS)和 scars)。临床上病 瘢痕疙瘩(keloid，K)又统称为病理性瘢痕(pathological 理性瘢痕不但发病率高，严重影响人类生存质量，而且有恶变倾向。目前，由于 创面愈合的多细胞参与、多阶段发展、多空间变化的复杂性等原因，病理性瘢痕 形成的具体机理仍不清晰。本研究基于瘢痕形成的免疫学假说，首次研究Thl趋化 细胞来源的趋化因子(CCL22／MDC)在病理性瘢痕组织中的表达，探讨其在病理性 瘢痕发病机制中的作用。 实验方法 瘢痕疙瘩患者24例为A组，男性ll例，女性13例，年龄9—45岁，平均29 ±16．7岁，病变部位包括前胸、肩背部及耳垂等，病程1．5年-28年。增生性瘢 病变部位包括面部、前胸、背部及四肢等，病程7个月一21年。瘢痕表面无感染 及溃疡，表面颜色由红至白不等，术前未行激光、冷冻、外用或局部注射药物等 任何治疗，患者无皮肤、免疫及传染性疾病。同时选取其他整形美容手术患者切 除的正常皮肤组织15例，作为对照C组。将新鲜组织置于冰盒内转运到实验室， 1．t 行OCT包埋，一80℃保存，实验前将标本块经冰冻切片机制成5Ill厚的冰冻切片。 丙酮固定30分钟干燥后，PBS冲洗3次，3％过氧化氢抑制内源性过氧化物酶活 性10分钟，PBS冲洗3次，免疫血清阻断非特异性抗原lO分钟，在每个标本分 u 别加30 滴加l：200稀释生物素化二抗，37℃恒温孵育20分钟，PBS冲洗3次，滴加l： IAEC 200稀释ABC复合物即三抗，37℃恒温孵育20分钟，PBS冲洗3次；滴加50|l 染液复染，镜下观察控制染色效果，染色时间约3一10分钟，自来水洗净，室温晾 干；苏木精复染3—5秒钟；用流水冲洗30分钟，氨水反蓝；阴性对照组省略第 一抗体，用PBS缓冲液代替。封片，保存，镜下观察，照相。结果判断标准：I—TAC 和MDC着色后细胞浆呈红色颗粒状，为阳性表达。每例标本选取10个高倍镜视野 (X400)计数，采用双人盲法，检测切片中阳性细胞占同类细胞总数的百分数和 阳性细胞的着色强度，应用半定量分级方法将其分为4个等级：①阳性细胞数少 于细胞总数的10％，为(一)；②阳性细胞数为细胞总数的10％一-30％，细胞浆呈浅 红色，为(+)；③阳性细胞数为细胞总数的30％--60％，细胞浆呈红色，为(++)； 为有统计学意义。 实验结果 一、l-TAC和MDC在病理性瘢痕组织中的定位 I—TAC和MDC弥漫性分布于真皮内成纤维细胞，局部分布于表皮内角质形成 细胞中，呈颗粒状，突出定位于细胞浆内。 二、I-TAC和MDC在成纤维细胞中的表达及对比 I—TAC和MDC在A、B组中呈高表达，与C组比较其差异具有统计学意义 (尺O．01)，但A、B组之间比较其差异无统计学意义(PO．05)。 2 结论 I—TAC和MDC可能通过趋化Thl／2淋巴细胞定向迁移引发一系列免疫炎性反 应，促进病理性瘢痕的形成。 关键词 CXCLl l／I—TAC；CCL22／MDC；病理性瘢痕 ·英文结构式摘要· in ofCXCLll／I—TACa