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TNF-α对SD 大鼠胰岛细胞凋亡及信号传导影响的研究 研究生：王功玲 导 师：文 芳 教授 中文摘要 第一部分 TNF-α诱导SD 大鼠胰岛细胞凋亡的研究 目的 探讨肿瘤坏死因子- α（TNF-α ）诱导体外SD 大鼠胰岛细胞凋亡及Bcl-2 和 BaxmRNA 表达水平的影响。 方法 成年雄性SD 大鼠胰腺经胶原酶P 消化, Ficoll400 纯化后获得胰岛, 在37℃， 5%CO ，RPMI 1640 培养液培养7 天，铺成单层, 用不同浓度TNF-α （分别为0、 2 10、30、50ng/mL ）继续孵育24 小时。应用脱氧核甘酸末端转移酶介导的缺口末 端标记法（TUNEL ）检测胰岛细胞凋亡率；应用半定量逆转录聚合酶链式反应 （RT-PCR ）检测胰岛细胞Bcl-2 和BaxmRNA 表达水平的变化。 结果 10ng/mLTNF-α 组胰岛细胞凋亡数与对照组比较无显著差异（P0.05 ）， 30ng/mL 和50ng/mLTNF-α 组胰岛细胞凋亡数与对照组比较显著增加（P0.05 ）。 10ng/mLTNF-α 能增加Bcl-2 mRNA 表达水平，而30ng/mL 和50ng/mLTNF-α 能显 著降低 Bcl-2mRNA 表达水平。10ng/mL 、30ng/mL 及 50ng/mLTNF-α 均能使 BaxmRNA 表达水平增加。 结论 (1) TNF-α 可呈浓度依赖性诱导体外培养的胰岛细胞凋亡。 (2) 30ng/mL 和50ng/mLTNF-α 能降低胰岛细胞Bcl-2mRNA 表达水平。10ng/mL、 30ng/mL 和50ng/mLTNF-α 均能使BaxmRNA 表达水平增加。TNF-α 诱导胰 岛细胞凋亡可能与胰岛细胞Bcl-2 mRNA 表达水平降低以及BaxmRNA 表达 2 水平增加有关。 关键词 TNF-α，胰岛细胞，凋亡，Bcl-2 ，Bax 第二部分 TNF-α对SD 大鼠胰岛细胞胰岛素信号转导的影响 目的 探讨 TNF-α 对体外 SD 大鼠胰岛细胞胰岛素受体底物-1 （IRS-1）、胰岛素 受体底物-2 （IRS-2 ）和葡萄糖转运子-2 （Glut-2 ）mRNA 表达水平的影响。 方法 成年雄性 SD 大鼠胰腺经胶原酶 P 消化, Ficoll400 纯化后获得胰岛素, 在 37℃，5%CO RPMI 1640 培养液培养7 天，铺成单层后, 加入不同浓度TNF-α （分 2 别为 0、10、30、50ng/mL ）继续孵育24 小时。应用放免法测定上清液胰岛素含 量；采用 RT-PCR 检测IRS-1、IRS-2 及Glut-2mRNA 表达水平的变化。 结果 10 ng/mL、30 ng/mL 及50ng/mL TNF-α 均能抑制在基础状态及高糖刺激下 胰岛胰岛素分泌。10ng/mLTNF-α 对胰岛细胞IRS-1、IRS-2mRNA 表达水平与对照 组相比无显著差异（P0.05 ）。30ng/mL 和 50ng/mLTNF-α 能显著降低胰岛细胞 IRS-1 和IRS-2mRNA 表达水平。10 ng/mL、30 ng/mL 及50ng/mL TNF-α 均能降低 胰岛细胞Glut-2mRNA 表达水平，呈剂量依赖关系。 结论 (1) 不同浓度 TNF-α （10ng/mL，30ng/mL 和 50ng/mL ）抑制胰岛细胞基础状 态和高糖状态下胰岛素分泌，这可能与TNF-α 降低胰岛细胞Glut-2mRNA 表达水平有关。 (2) 30ng/mL 和50ng/mLTNF-α 能降低胰岛细胞IRS-1 及IRS-2mRNA 的表达水 平，从而影响胰岛细胞信号转导，这可能是TNF-α 引起胰岛细胞功能障碍 的机制之一。 关键词 TNF-α，胰岛素受体底物-1，胰岛素受体底物-2 ，葡萄糖转运子-2 3