再生障碍性贫血化t细胞长期生存机制及其潜在凋亡介导功能的研究.pdfVIP

再生障碍性贫血活化T细胞长期生存机制及其潜在凋亡介导功能的研究 中文摘要 再生障碍性贫血活化T细胞长期生存机制 及其潜在凋亡介导功能的研究 硕士研究生： 李文新 导 师：张学光 中文摘要 anemia，AA)简称再障，是由多种因素引起的骨 再生障碍性贫血(aplastic 髓造血功能衰竭，并以全血细胞减少为主要临床表现的一种综合症。由于免疫 抑制疗法在再障治疗中的成功应用，关于再障产生的免疫因素成为血液学和免 疫学工作者共同关注的问题。经过近三十年的系统研究，T细胞在再障形成中的 主导作用逐步得到确证。目前，再障被认为是一种与免疫密切相关的、主要由T 细胞介导的、具有器官特异性自身免疫病特征的血液系统疾病。T细胞的异常 活化是再障产生的免疫病理机制中的核心事件。本课题即以此为核心，就再障 患者体内异常活化T细胞的长期生存机制及其潜在的凋亡介导功能进行了研究。 cell 激活诱导的细胞死亡(activation．induced death，AICD)，是近年来发现 的一种重要的维持体内T细胞稳态及T细胞外周耐受的机制。AICD机制的障碍 也于近年来被认为是以自身耐受的破坏为特征的自身免疫病(尤其是与T细胞 相关的器官特异性自身免疫病)的一个重要诱发因素。有着促T细胞增殖和抗 AICD双重功效的T细胞生长因子——IL．15也因此而成为自身免疫病研究的关 注对象，并被证实与许多自身免疫病密切相关。鉴此，本课题围绕T细胞异常 活化所做的第一部分工作就是对骨髓造血微环境的主要构成细胞——骨髓基质 marrowstromal 细胞(bone ceils，BMSCs)在再障情况下是否存在IL．15的异常 表达进行研究。通过对再障患者的BMSCs(AA．BMSCs)进行体外原代培养，借 助免疫荧光标记和流式细胞技术，在AA．BMSCs上检测到IL．15特异的荧光信 号，平均荧光强度(meanfluorescence 为5．62±2．14，而正常对照组几乎检测不到IL．15特征性的荧光信号。MFI比值 为1．01±O．30，两者相比有显著性差异(PO．001)。此外，借助激光共聚焦显 微分析技术，在从·BMSCs上观察到有膜特征性的、IL．15特异的荧光信号。上 l 再生障碍性贫血活化T细胞长期生存机制及其潜在凋亡介导功能的研堕 主主塑薹 IL-15，mlL-15) 述结果表明，AA．BMSCs上有膜结合型IL一15(membrane—bound u 与不加IFN．Y组相比蓑异显著(尸O．001)；而l g／ml的CsA的同时加入，可 行的细胞增殖实验显示，AA-BMSCs具有显著的促T细胞增殖活性。抗lL．15Ab 和抗IL．2／15R y-cfr徂b可显著抑制AA．BMSCs的促T细胞增殖活性，且两种抗 体在功能上表现出一定的协同效应。另外，将AA．BMSCs与T细胞用隔膜孔径 u 为O．3 增殖效应。上述结果表明，AA．BMSCs的促T细胞增殖活性主要由其表面的 础的角度，对再障患者体内(尤其是骨髓造血微环境中)异常活化T细胞长期 存在的现象作出了合理的解释，而且也为临床工作给予了有益的提示，如是否 能够以1L．15这一导致T细胞AICD机制障碍的分子为靶向，设计一些更为合理 的AA免疫抑制治疗方案，使异常活化的T细胞及时地步入凋亡，而保留静息T 细胞必要的免疫应答和免疫监视功能，从而避免或减少由于广谱性免疫抑制剂 的过量使用所导致的再障治疗后期由于患者免疫功能的低下而出现的远期克隆 性疾病(如阵