人类脂肪组织来成体干细胞体外培养的生物特征及转基因向软骨细胞诱导分化的实验研究.pdf

人类脂肪组织来源成体于细胞体外培养的生物特征及转基因向软骨细胞诱导分化的实验研究 人类脂肪组织来源成体干细胞体外培养的生物特征 及转基因向软骨细胞诱导分化的实验研究 专业：外科学 骨外科专业 博士生：雷磊 导师：廖威明教授 中文摘要 【前言】 由创伤、骨关节炎等引起的关节软骨病损是骨科常见疾病，已成为导致关节 功能丧失的主要原因。由于关节软骨是无血管、淋巴管和神经的组织，自身修复 能力十分有限，一旦损伤后可导致关节功能活动受限和障碍。给患者及其家人、 社会都带来了极大的痛苦和沉重负担，如何修复损伤的关节软骨是骨科临床一直 以来所面临的一项难题。 局限于软骨浅层的缺损和疾病，依靠软骨细胞有限的分裂能力仅有微小的内 源性修复或者难以修复；而全层关节软骨缺损，贝fJ由骨髓迁徙而来的问充质干细 胞填充缺损区域，并分化为软骨细胞，形成新生修复组织，其组织类型介于纤维 软骨和透明软骨之间，即“软骨疤痕”组织，尽管其填充了软骨缺损部位，但是其 生理特性与正常软骨组织相比，组织弹性、耐磨性和摩擦性等都不能满足关节的 正常生理活动，远期易于发生退变。目前，在关节软骨损伤的修复治疗中，一般 采用软骨钻孔术、关节镜下软骨磨削及灌洗术、自体或异体组织(骨膜、软骨膜、 骨软骨块等)移植、细胞(软骨细胞或间充质干细胞)移植等方法，虽然在近期获 得症状改善，但在形态学、生理学和生物力学等方面难以恢复正常，远期疗效依 然欠佳。组织工程技术是通过获取自体或异体少量组织细胞，在细胞因子的作用 下，经体外培养扩增后与特定的支架材料相复合，构建与病损区域结构、生物学 特性相近的细胞一生物支架复合体，以修复和替代损伤组织的一门新兴学科。随 着其研究的逐渐深入，运用组织工程学原理再造人工软骨组织成为可能，展现出 人类脂肪组织来源成体干细胞体井培养的生物特征及转基因向软骨细胞诱导分化的实验研究 美好的前景。组织工程学原理包括三项主要内容：种子细胞、细胞诱导生长因子 和支架材料。以自体软骨细胞作为种子细胞，其来源相对有限，体外多次传代培 养细胞易发生“去分化”现象，从而丧失分泌软骨细胞外基质的能力，因此难以通 过少量自体软骨组织经体外培养而获得大量具有正常功能的软骨细胞。目前软骨 组织工程学种子细胞的研究热点聚焦于具有自我繁殖能力并且可以定向分化的 组织干细胞，包括胚胎干细胞和成体干细胞。其中胚胎干细胞获取相对不易，同 时涉及伦理学的相关问题，限制了其临床应用。而成体干细胞则广泛分布在机体 组织中，包括肌肉、血管、肝脏、胰腺和脂肪组织中，来源广泛。脂肪组织来源 的成体干细胞(human derivedadultstem adipose cells，hADASc)由于其来源相对广 泛、取材方便，给患者带来的痛苦较小，而日益受到组织工程研究者的重视，在 骨与软骨组织工程学研究中展现出相当的优势。转化生长因子B(transforming factor growth p，TGF．D1)是一大类多功能细胞因子。体内几乎所有的正常组织 或细胞都能合成释放某种TGF．p家族成员，并表达该家族成员的膜受体。TOF．p 广泛参与哺乳动物的各种病理生理过程，影晌软骨细胞的增殖分化，在台4伤愈合、 胚胎发育、细胞外基质形成、骨和软骨的重建、免疫调节以及神经系统的发育过 程中发挥重要作用。目前，TGF．B1被公认为软骨组织工程学中最重要的细胞因 子之一。 本实验研究针对目前软骨组织工程学中，研究发现的脂肪组织来源干细胞在 特定环境下，定向分化修复软骨缺损的现象，在体外实验室条件下，进行人类脂 肪组织来源干细胞分离、培养、鉴定；评价其生理特性及与供体年龄之问的关系； 以及将重组PGL3．TGFDI基因转染脂肪来源干细胞，在定向诱导培养基环境下， 进行体外诱导，从实验室阶段客观评价其向软骨细胞定向诱导分化的可行性和能 力，为进一步的临床研究和应用奠定基础，提供可靠的实验室依据。 【目的】 研究人类脂肪组织来源成体干细胞(hADASc)体外分离、培养及表面抗原分 子特征：研究人类脂肪组织来源成体干细胞(hADASc)体外培养的生物学特征及 染人类