人食管下括约肌巴胺受体的表达规律.pdfVIP

中文摘要 人食管下括约肌多巴胺受体的表达规律 摘 要 目的：人食管下括约肌(LES)是位于食管胃连接部特殊 次提出人LES由位于胃小弯侧呈半环形的钩状纤维(clasp fibres)幂[!位于大弯侧呈斜行分布的套索纤维(slingfibres)共 同构成，这两束肌纤维与膈脚一起在食管胃结合部形成高压 带，维持LES的关闭状态，使LES形成一种类似单向阀门 的结构。正常状态下，由于LES的持续性收缩使胃内容物 不能反流入食管，另一方面，由于LES的适时舒张允许了 食物继续下行入胃，或呕吐和打嗝，使胃内的液体或气体反 流如食管并经口腔排出。LES的收缩和舒张功能调节机制 非常复杂，包括了神经系统、体液因素及自身肌源性等多种 因素。多巴胺(DA)受体作为G蛋白偶联受体家族重要的 受体类型之一，广泛存在于哺乳动物的中枢及外周神经系 统，并发挥着重要的作用。到目前为止已经发现它有 D1R．D5R五种亚型，通过对腺苷酸活化酶活性的调节，可 以实现不同部位平滑肌的收缩与舒张。按照其亚型对腺苷酸 活化酶活性的不同作用，又将DA受体分为两大类即D1样 受体 样受体激活腺苷酸活化酶活性，而D2样受体降低激活腺苷 酸活化酶活性。但目前国内外对人LES受体类型及其分型 以及调节机制的研究，主要局限于胆碱能受体，对于DA受 体的研究则相对甚少。现有的对食管粘膜DA受体的研究也 中文摘要 主要是针对动物(负鼠等)，与人有着种属，生理学的差异， 对于人LES的DA受体的表达规律及调节机制的相关研究 则未见报告。本试验采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和 亚型在套索纤维、钩状纤维、食管环行肌和胃底环行肌中 mRNA、受体蛋白的表达规律，为进一步研究DA受体在人 LES调节机制中的作用奠定基础，从而更为完善的阐述人 LES调节机制，为食管运动功能障碍性疾病的临床治疗提 供理论依据。 方法： 1选取2007年12月到2008年lO月在我院因高位食管 中段癌行食管大部切除术患者30例，其中男性23例，女性 7例。手术室采集新鲜食管胃连接部手术标本，锐性剥去胃 贲门部及食管下段的粘膜层及粘膜下层后，制备套索纤维 的肌条； 2按照lml 件下用组织匀浆器加充分研磨组织，然后依次通过氯仿萃 取，异丙醇沉淀和75％乙醇的洗涤作用最终制备出组织 RNA。DEPC水溶解，经紫外分光光度计和1％琼脂糖凝胶 电泳鉴定其纯度和完整性之后，应用5种DA受体亚型的引 Pro 软件分析扩增产物的光密度值(IOD)，并计算DA受体亚型 与13．actinIOD的比值表示mRNA的相对含量； 3按照100ul 中文摘要 离心10分钟。弃上清后，以美国PIERCE公司的膜蛋白提 取试剂盒制备膜受体蛋白，考马斯亮蓝G．250定量，调整 蛋白至相同浓度后，应用电泳仪电泳，分离出与5种DA受 体亚型的分子量大小相应的蛋白后转膜，最后应用DA受体 亚型抗体行Westernblot检测蛋白的表达，并分析IOD值。 结果： 1 处亮度均匀，在各反应中，扩增结果基本一致。有3种DA 受体亚型mRNA在各肌条中均有表达，分别是DlR，D2R， D5R，扩增产物的长度与预计的一致，分别为455、279、 IOD比值有统 363bp。相同肌条不同DA受体亚型与13．actin 受体亚型不同的肌条间mRNA的表达无统计学差异。另外 两种受体亚型D3R，D4R的mRNA在四种肌条中均无表达。 2Western blot3种DA受体亚型有其相应蛋白条带的表 1、53。 达，分别是DlR，D2R，D5R，分子量分别为51、5 相同肌条不同受体亚型蛋白表达的IOD值有统计学差异 强到弱的顺序为DIR，D5R，D2R。相同受体在个肌条间没 有蛋白表达的差异另外两种受体亚型D3R