内脏高敏感性形过程中脑-肠互动作用的实验研究.pdfVIP

中文摘要 l研究背景 bowel 功能性肠病(functional bowel syndrome，IBS)是普通人群中非常常见的疾病，严重影响患者的生活质量。 但目前没有这些疾病诊断的生物学标志以及治愈疾病的疗法， 因为无明确的病 因和发病机制被确定。最近几年，越来越多的证据表明借助脑一肠之间的联系脑一 肠互动在IB$发病中的重要性。但在IBS的发病机制中，除零散的描述性研究， 如结肠黏膜肥大细胞活化和内脏高敏感性之间的关系、结肠扩张过程中脑核团活 化的研究外，很少系统研究脑一肠互动的作用。在很大程度上，这是因为在人体 实行这类研究的困难和缺乏合适的动物模型。 在以前的研究中，王伟岸等发现选择性条件刺激可诱发IBS患者对肠道气囊 扩张的阈值降低，以樟脑特殊气味为条件刺激、以肢体束缚和直肠伤害性扩张刺 激为非条件箭j激，他们在wistar大鼠建立了类型IBS发病特征的心理应激应激 动物模型，这些模型被一些胃肠病学专家认为是一种理想的研究脑一肠互动在IBS 发病机制中作用的理想模型。不过，该模型有一些缺陷，如如何定量条件刺激的 强度。 + 基础和临床研究表明，胃肠道肥大细胞在胃肠生理和胃肠疾病有关的病理生 理调节中其中的作用，一些描述性研究显示支配黏膜的神经周围结肠肥大细胞浸 润和介质释放可能是导致IBS患者腹痛的原因，但没有报道研究结肠黏膜肥大细 胞活化对内脏性铜传递中上游途径的调制作用。尽管大量的有关NMDA受体在躯 体痛中作用的报道，但只有少数研究涉及内脏性痛的传递，其中多数研究采用的 是急性内脏特性痛模型。最近，一些研究提示肥大细胞活化可能与NMDA受体活 化存在联系。 是强啡肽原和c-los基因转录的抑制子，一些研究者认为“无DREAM，无疼痛”。 因此，DREAM可能是疼痛调制的关键的转录的抑制子。不过，迄今，没有DREAM 在内脏疼痛传递作用的研究。 肠道微环境，包括肠神经系统以及其支持细胞——肠神经胶质、肠内分泌细 胞、 黏膜免疫系统、平滑肌细胞以及起博细胞Cajal间质细胞(ICC)，是胃肠 功能调节的重要合胞体，其功能障碍将导致胃肠疾病有关的症状，但很少了解 ICC和肠神经胶质细胞可塑性在肠功能紊乱中的作用。 因此，本研究旨在进一步优化条件刺激诱发的内脏高敏感性模型，在此基础 上进一步研究脑一肠轴的一些元件在内脏高敏感性形成过程中的可塑性变化特 征。肥大细胞一NMDA受体活化在该模型中对内脏高敏感性形成的影响也进行研 究。初步了解DREAM在内脏性痛传递中的作用。 2材料和方法 根据以前的实验选用II级雄性Wistar太鼠作为模型动物，顺序旄加不同 组合的条件刺激(包括樟脑特殊气昧和定量彩色闪光刺激)和非条件刺激(包 括伤害性结直肠扩张、非伤害性结直肠扩张+定量间歇性结肠内充气、0．6％醋酸 诱发的结肠黏膜炎症)，施加方式见图l。采用腹壁肌电活动、胃结肠反射、粪 便物质排出量作为检测内脏反应的指标。 3 5 6 9 1 2 Day Day Day Day Day Day 鑫+。。 。。+j： 。。t 。。+。。t。。+。。 十 。。 l stimuli stimuli，cc)和非条件刺激(non—condttional 图l条件刺激(conditionaL NC)施加顺序示意图 根据内脏对条件刺激的反应特征，最终选择定量彩色闪光刺激为条件刺激， 非伤害性结直肠扩张加间歇性定量结肠内充气为非条件刺激。在内脏高敏感性形 成过程中，采用大鼠肥大细胞蛋白酶II酶联免疫吸附测定检测结肠黏膜肥大细 胞活化情况，采用免疫组织化学方法评价ICC、肠神经胶质以及中枢神经系统可 塑性变化的特征，采用的标志物包括c—Kit(ICC)、胶质细胞系源性神经营养因 Connexin一43(缝隙连接)以及c—Fos(细胞活化)。 为了研究肥大细胞一NMDA受体活化对该动物模型内脏高敏