人il-10和cl-2重组腺病毒经冠脉转染大鼠心肌的实验研究.pdfVIP

摘要 达规律及安全性 方法：(1)构建复制缺陷型重组腺病毒：采用分子克隆手段获得 携带增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因的重组质粒，和携带人白介素 在293细胞内分别扩增，应用氯化铯密度梯度离心法纯化病毒。 主、肺动脉根部阻断循环10秒钟，同时于左心尖部注射各组相应试 环内分布。第1组于术后第3天处死，取心、肝、肺、肾、脑，做快 速冰冻切片观察绿色荧光蛋白表达分布情况；其余各组于术后第l、 3、7、14、28天分别处死，抽血及取心脏做成组织匀浆，用ELISA 法测定血浆及组织匀浆中hIL一10、hBcl．2水平；取心、肝、肺、肾做 组织病理切片，观察炎症反应：抽血测定血常规、肝、’肾功能、心肌 酶。 结果： (1)经氯化铯纯化滴度分别为，Ad．EGFP： 1．7x1010Pfu／ml。 (2)I组于术后3天心肌快速冰冻切片荧光显微镜下可见大量绿 色荧光，心肌外组织未检测到。 基因表达持续28天，m浆及PBS组心肌匀浆中未有可检测到的 llIL．1 0、hBcl一2基因表达产物。 (4)各组心、翳、膝、4鬻组织病理切片均未冤甥嚣炎瘫反瘫 (5)各组心肌酶、野肾功能、壶常规与对照组相比无显著l生差别。 安全高效表达，第3天为表达高峰，且仅仅局限于心肌组织，未见机 体有明显免疫、炎症反应。 关键词：腺病毒载体，基因转移，B细胞淋巴瘤因子一2，白介素 10 Abstract observethe and of safety Ob{ectives：To expression andBcl一2 humanIL—lO intracoronarv．adenovirus—mediatedgene torat transfermyocardium． ent Methods： ofthe ication—defici (1)Constructionrepl andBcl～2． IL一10 adenovirus human recombinant carring enhanced green Recombinant PXCEGFP(containing plasmids EGFP green fluorescence protein IL—lO were human fluorescence gene)，PXCBcl一2 protein molecular Recombinantadenovirus constructed cloning． by were