人脐带间充质干胞移植对大鼠脊髓损伤神经功能恢复的评价.pdf

中文摘要 人脐带间充质干细胞移植对大鼠脊髓 损伤神经功能恢复的评价 摘 要 目的：中枢神经系统损伤后再生修复的研究一直是神经 科学领域的热点。近年来，间充质干细胞在神经组织的修复、 再生和功能重建中所起的促进作用日益引起关注。干细胞移 植于神经系统疾病与损伤的模型后，可促进损伤区的神经修 复和再生以及神经功能的改善，为治疗中枢神经系统缺血、 变性、损伤性疾病及其它各种疾病展示了崭新的希望。骨髓 间充质干细胞、脐血问充质细胞等均已被作为细胞来源用于 脊髓损伤的神经修复，并显示其有促进神经再生及改善动物 神经恢复的功能。特别是骨髓间充质干细胞因具有良好的体 内、体外神经分化潜能，是目前最被看好的干细胞来源之一。 然而，作为MSCs经典来源的骨髓组织，’叫‘随老化而致干细 胞含量及其增殖能力显著降低。 因此，寻找新的MSCs来 源有着重要意义。我们最近从易于获得、组织来源上较为原 始的人脐带组织中分离的MSCs，经传代培养和诱导证实其 具有向神经元样细胞和星形胶质细胞分化潜能，以适当的方 案诱导后可高比例地选择性分化为神经元样细胞。人脐带间 licalcord stem umbi 充质干细胞(human mesenchymal 伦理和道德等方面的障碍；③分离得到的细胞形态、表型相 对均～；④脐带内的MSCs含量高，且细胞增殖能力稳定，可 在短时间内获得足够的细胞； 中文摘要 分子，免疫源性较弱。本研究旨在体外研究的基础上，观察 hUCMSCs移植到大鼠脊髓损伤模型后存活、分化情况以及 对神经功能恢复的影响，为细胞移植寻找一种新型的具有良 好应用前景的细胞来源提供理论依据，进而为其在脊髓损伤 治疗中应用奠定基础。 方法：hUCMSC来源于剖腹产的正常胎儿脐带，用组织 块培养法，经传代进行扩增，弃去未贴壁细胞，细胞传3-6 代，hUCMSCs流式细胞学检测细胞表面抗原，首先证实其为 脐带间充质干细胞以备移植之用，移植时调至细胞终浓度l ×105／ul。取SD大鼠70只，随机分为3组：①脊髓半切 +hUCMSC组(n=30)，②脊髓半切+PBS组(n=30)幂n③假 手术组(n--10)。脊髓!I刍切模型经大鼠胸背后正中切121，咬除 T8、9棘突和椎板，手术显微镜下用虹膜剪将T9左fN_-,t三脊髓 剪断。脊髓半切+hUCMSC组和PBS组又分为头侧注射、 尾侧注射和头尾两侧注射三个贬组。微量注射器固定于立体 0min内缓慢注 定向架，hUCMSCs组将hUCMSCs悬液在1 入到脊髓半切头侧(头侧注射组)或尾侧(尾侧注射组)损伤临 近区域的灰白质交界处(距脊髓表面约0．7mm)，每点691，总 细胞数6×105细胞；头尾两侧注射组于半切头尾两侧损伤临 05细胞， 近区各取一点注射，每点391，总细胞数亦为6×l 留针5min，拔针后针孔用医用生物蛋白胶封闭以防细胞外 漏。移植后1、7、14、21、28天观察大鼠神经功能恢复情 况，采用改良Tarlov评分对动物进行行为学检查，测量抓 握、维持姿势能力。于移植后28天用4％多聚甲醛灌注处死 大鼠，取出脊髓损伤组织行连续冰冻横切片，厚5lain；首先 应用MABl281免疫组化染色检测移植到脊髓的hUCMSC是 中文摘要 否存活，然后行免疫组化双标染色检测存活的hUCMSC胶 达情况。 结果：hUCMSCs流式细胞学检测细胞表面抗原发现，造 血前体细胞标志抗原CD34、白细胞标志抗原CD45、淋巴细 胞表面抗原CDl la、单核细胞／巨噬细胞表面抗原CDl4等 性，提示MSC具有异体移植可行性；MSC的标志抗原CD29、 CD44、CDl05均为阳性，证实该细胞为脐