人脐血单个核细移植对大鼠急性心肌梗死后心功能及左室重构的影响.pdf

入脐血单个核细嬲移植对大鼠急性心肌梗死后心功能及左室鬣构的影响 人脐血单个核细胞移植对大鼠急性心肌梗死后 心功能及左室重构的影响 孛由大学瓣，||嚣第一蓬藏心内秘 学位申请人：王小庆 导师：胡承恒副教授 中文摘要 急缝·＆瓿梗琵(AMI)后薪造藏瀚心飘细缒坏死鞠纤维疤癜形成最终薅警致 不可逆转的左心室功能减退，这也是造成心肌梗张(MI)病人孤亡和生活质凝 下降的主要原因。虽然鼹前可实施药物溃疗及早期介人于预，但已丢失的心肌不 能荐生。i霞年来心瓿细胞重塑为MI治疗疆供了一个有希望静凝方法，班兹搿弼 种子细胞多来源于胚胎于细胞、骨髓于细胞(造血于细胞，间充质干细胞及边缘 细胞)、骨髂肌卫星细胞及胎心细胞等，最近国外亦有利用脐血于细胞做神子缨 麓静体蠹域体外试验豹缀道。耪盘誊含造盘干缩施，嗣霹含阀焱袋子缁胞及内皮 祖细胞，且取材方便，是理想的种子细胞来源，本研究将含脐血干细胞的人脐肌 单个核细胞(hucBc)注射到大鼠MI部位，观察大鬣心功能改变及左室重构情况， 材料和方法 1．hUCBC提取鞠标记：10傍藏搬均来自中由大学附属第一医院产辩，产妇 健康。分离方法采用羟乙基淀粉(贺斯)沉淀加ficoll--paque密度梯度离心法。 移植前将细胞置于含10umol／L溴脱辍尿嘧啶核蛰(Bfdu)和lO％胎牛血潦的 植前细胞标记。BrdU是DNA前体胸腺嘧啶核督类似物，在细胞培养过程中， BrdU可以掺入薪合成的DNA链，通过生物素．链撼亲和素连接躲抗体及DAB系 统显色采梭测BrdU，定位已标记稳移植细胞。 入脐盘攀个梭细胞移植对犬鼠急性心就梗死后心功能及左室重掏的影响 2．动物模型制作和细胞移植：Wistar雄性大鼠，体戴150--2009，购自中山 大学镑穆中心。大藏分为三缀，每缝套ls只，MI对照缀秘移撞组动物均在气管 7个细胞／150ul单个核细胞懋液分三点 插管偌行开胸手术，结扎成功聪，将3×10 注射到梗死区与难常心肌交界处，MI对照缎注射等量DMEM。假手术组仅开胸 劳焱庄嚣簿支下l建线，不缝曼。 3．心功能检测：细胞注射4周后，利用超声心动图行心脏检查。超声评价 后，经右侧颈动脉插入左心导管至左心室，与多导生理纪泶仪相连，记泶血流动 力誉参数。 4．标本检测及胶原密度檎测：细胞移桷后四周，处死动物，取心脏标本。 沿心脏长轴将心脏从心失至结扎点切成五片，每片厚约2ram。4％多聚甲醛固 定24小露，石臻毽理，5um孬逶续霹冀，行HE要色及Masson染色班滋褰心嚣惩 病理改变，同时利用图像分析仪对非梗死区行胶原容积定墩分析，以了解MI后心 肌间质胶原重构情况。 5，标记缨熬稔测：失捡潮移聿壹绥爨戆存活洼及去爱，穆撞兹缀熬羁麓BrdU 标记。动物处死厝，取两只大鼠心脏组织切片，用抗BrdU单克隆抗体行免疫组 化染色，存活的移植细胞BrdU染色阳性。 6。统诗拳分褥：涮量缀豢耀i±s表示，缝蠢踅较袋建方差分辑，骧p0．05 为藏异有统计学意义。统计学处理采用SAS软件进行。 结袋 1．一般情况：在冠状动脉结扎复制AMI模型的手术中，动物没有死亡。结 扎瑟数分镑，帮可溪察委冠羧旗稼左蓑降支供盘区域颧稳发自。毽是，零盖养殖 过程中，有少数动物死亡：移植组死亡1只，MI对照缎死亡2只，假手术组死 亡1只。多死于术后一周内，主要是因为手术刨伤、动物抵抗力下降所造成的胸 羧慧染j莠致，MI对照维毒t哭寒焉第30天行踅声捡套簿，死予惫羲友心衰竭， 表现为呼吸频率明显加快，阴腔，鼻腔有大量粉红泡沫痰涌出。 2+魂物搂黧洋债：左蓠醛支结藐西躅霜，HE染色黧典墼疆死熬瘸瑾改交， Ⅱ 人脐血单个核细胞移植对大鼠急性心肌梗死后心功能及左室嚣构的影响 左室前壁透壁性梗死，可见梗死区明显变薄，并农大量纤维结缔组织形成。 3．干细胞移植对AMI大鼠血流动力学的影响见表1。其中LVSP、+dp／dt。。 为反映左察收缩功能的指标，其僮越离说明心脏收缩功能越好；L